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生态环境检测实验室标准菌株管理规范

1范围

本文件规定了生态环境检测实验室标准菌株管理的一般要求和流程。

本文件适用于生态环境检测实验室标准菌株的管理。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27405-2008实验室质量控制规范食品微生物检测

GB50346生物安全实验室建筑技术规范

SN/T2660食品微生物实验室菌种保藏方法

3术语和定义

GB/T27405-2008界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1

标准菌株referencestrain

至少定义到属或种水平的菌株。按其特性进行分类和描述，有明确的来源。

[来源：GB/T27405-2008，3.10]

3.2

标准储备菌株referencestocks

标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。

[来源：GB/T27405-2008，3.11]

3.3

储备菌株stockculture

标准储备菌株经过转接后获得的同种菌株。

3.4

工作菌株workingcultures

由标准菌株、标准储备菌株、储备菌株或4代以内经过转接获得的同种菌株，直接用于培养基检验、人员比对、阴性及阳性对照等实验活动。

3.5

代generation

将微生物接种至新鲜培养基上或培养基内培养生长一次即为一代。

注：按照菌株的传代过程，对各代菌株的代数、使用类型、继承关系，附录A中给出了进一步的说明。

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4一般要求

4.1人员

4.1.1技术人员应覆盖标准菌株管理工作流程的全部环节。

4.1.2技术人员应经专业技能培训，经能力确认合格后方可上岗。

4.1.3涉及色彩辨识的实验，不应选用有颜色视觉障碍的人员。

4.2场所与设备

4.2.1应按照检测活动内容配置符合相应生物安全等级要求的实验室，实验室应符合GB19489和GB50346的相关规定。

4.2.2应根据标准菌株的性质配备保藏、制备、销毁等设备。

4.3安全防护

4.3.1应按照检测活动内容配置符合微生物危害等级要求的生物安全防护用品，并设置安全标识。

4.3.2标准菌株的保藏和领用，应实行双人双锁负责制管理。

4.4记录

应对标准菌株的管理进行记录并归档留存，档案留存期限不少于6年。

5管理流程

5.1流程概述

管理流程包括采购、验收、保藏、期间核查、制备、销毁。标准菌株管理流程按附录B执行。

5.2采购

应从有销售资质的机构获取有明确来源的标准菌株。采购申请记录应包括菌株名称、来源、代数、数量等内容。

5.3验收

标准菌株验收检查内容包括名称、规格、数量、包装、有效期、说明书、证书等。如需对标准菌株进行存活性和纯度确认，按5.6.2.1-5.6.2.3执行。验收记录表参见附录C中的表C.1。

5.4保藏

5.4.1标准菌株应按照供应商提供的使用说明书要求进行保藏。

5.4.2标准储备菌株、储备菌株、工作菌株的保藏方法按照SN/T2660执行。

5.4.3工作菌株保藏宜采用斜面培养法。

5.4.4保藏和领用记录表参见附录C中的表C.2。

5.5期间核查

应根据菌株类型、数量、保藏期限等，制定菌株保藏期间核查计划，计划应对具体菌株、核查方法、频次、文件记录、结果判定等内容进行规定。期间核查方法包括文件核查、存活性核查、关键生化特性核查。期间核查记录表参见附录C中的表C.3。

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5.6制备

5.6.1制备要求

5.6.1.1制备过程应在无菌条件下进行。

5.6.1.2培养条件应按照供应商提供的使用说明书要求进行。

5.6.1.3培养物应进行标识，标识内容应包括名称、菌种号、传代日期和代数及使用类型等信息。

5.6.1.4应记录制备信息，制备记录表参见附录C中的表C.4。

5.6.2制备过程

5.6.2.1复苏

拆开标准菌株的包装，按照供应商提供的使用说明书要求对标准菌株进行复苏。

5.6.2.2平板分离

采用非选择性平板对复苏后的标准菌株进行分离、纯化。

5.6.2.3确认

对平板分离出的菌落进行存活性、纯度确认。确认合格后，方可进行制备。如确认不合格，应及时灭菌销毁。

5.6.2.4标准储备菌株制备

挑取纯菌落进行分装保藏，即得到标准储备菌株（第2代）。标准储备菌株制备流程按照附录D执行。标准储备菌株不应作为标准菌株使用。