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水中6种雌激素和酚类环境雌激素的测定固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了地表水、地下水、污水等水体中壬基酚、辛基酚、雌酮、雌二醇、雌三醇和炔雌醇等6种雌激素(包括酚类环境雌激素)的固相萃取-高效液相色谱-串联质谱检测方法。

本标准适用于附录A规定的地表水、地下水、污水等水体中壬基酚等6种雌激素（包括酚类环境雌激素）的定性和定量测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

HJ/T91地表水和污水监测技术规范

HJ/T164地下水环境监测技术规范

3方法原理

水中的雌激素类化合物经固相萃取柱富集，用液相色谱/串联质谱法分离检测。根据保留时间和特征离子峰定性，内标法定量。

4试剂和材料

4.1总则

除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯。试验用水应符合GB/T6682中一级水的标准。

4.2标准试剂

4.2.16种雌激素类化合物标准储备液：ρ=1.00mg/mL（参考浓度）

可直接购买炔雌醇，雌酮，雌二醇，雌三醇，辛基酚和壬基酚有证标准溶液，也可用标准物质制备。储备液应在-10℃以下避光保存或参照制造商的产品说明。使用时应恢复至室温，并摇匀。

4.2.26种雌激素类化合物标准使用液：ρ=500ug/L（参考浓度）

将6种雌激素类化合物储备液（4.2.1）按需要用甲醇（4.2.5）稀释。标准使用液在-10℃以下避光保存。使用时应恢复至室温，并摇匀。

4.2.3内标物储备液：ρ=100ug/mL（参考浓度）

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双酚A-D16，作为雌酮、雌二醇、雌三醇和炔雌醇四种雌激素的内标参照，可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质制备。储备液应在-10℃以下避光保存或参照制造商的产品说明。使用时应恢复至室温，并摇匀。

壬基酚-D8,作为辛基酚和壬基酚2种酚类环境雌激素的内标参照，可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质制备。储备液应在-10℃以下避光保存或参照制造商的产品说明。使用时应恢复至室温，并摇匀。

4.2.4内标物使用液：ρ=10.0mg/L（参考浓度）

取两种内标物储备液（4.2.3）按需要用甲醇（4.2.5）稀释。标准使用液在-10℃以下避光保存。使用时应恢复至室温，并摇匀。

4.2.5HPLC级的试剂

HPLC级的试剂有：

——氨水：HPLC级；

——甲醇（CH3OH）：HPLC级；

——乙腈（CH3CN）：HPLC级；

——乙酸乙酯（C4H8O2）：HPLC级。

4.2.6混合溶液

混合溶液有：

——乙酸乙酯/甲醇混合溶液：9+1，体积比；

——甲醇/水混合溶液：1+9，体积比；

——甲醇/水混合溶液：1+1，体积比；

——0.05%氨水溶液：0.05+99.95，体积比；

——硫酸溶液：1+1，体积比量取50mL浓硫酸（4.2.7），缓慢加入到50mL水中。

4.2.7其他试剂

硫酸（H2SO4):ρ（H2SO4)＝1.84g/mL。

4.3材料

实验材料主要有：

——固相萃取柱：填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱；——氮气：纯度≥99.99%；

——氩气：纯度≥99.999%；

——滤膜：0.7μm玻璃纤维或其他材质等效滤膜。

5仪器和设备

5.1固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。

5.2浓缩装置：氮吹浓缩仪或性能相当的设备。

5.3液相色谱/串联质谱仪:配有电喷雾离子源（ESI）。

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5.4色谱柱：C18或等效反相高效液相色谱柱。

5.5马弗炉：温度可调至450℃。

5.6一般实验室常用仪器和设备。

6试样采集与保存

6.1试样的采集

磨口棕色玻璃瓶预先洗涤干净，置于马弗炉中450℃烘烧2h后，待用。

参照HJ/T91和HJ/T164的相关规定采集样品。

6.2试样的保存

采集的水样添加硫酸溶液（4.2.6）调节最终pH为2，置于0-4℃避光保存，20天内分析完毕。

7测定步骤

7.1试样预处理

对于无明显悬浮物的水样可直接按7.2步骤进行固相萃取。

对于悬浮物较多的地表水或废水样品，应采用孔径为0.7um的玻璃纤维膜（4.3）过滤后再进行固相萃取。

7.2固相萃取

分别用10mL乙酸乙酯/甲醇混合溶液（4.2.6），10mL甲醇（4.2.5）和10mL实验用水活化固相萃取柱，保证小柱柱头浸润。量取1000mL滤后样品（7.1），添加适量硫酸溶液