饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、特丁基对苯二酚、乙氧基喹啉和没食子酸丙酯的测定.docxVIP

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饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、

特丁基对苯二酚、乙氧基喹啉和没食子酸

丙酯的测定

1范围

本文件描述了饲料中丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ)、乙氧基喹啉(EQ)和没食子酸丙酯(PG)的高效液相色谱测定方法以及饲料中BHA、BHT、EQ的气相

色谱测定方法。

本文件中“高效液相色谱法”适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料、饲料原料中BHA、BHT、TBHQ、EQ和PG含量的测定，“气相色谱法”适用于配合饲料、鱼粉

中BHA、BHT和EQ含量的测定。

本文件中BHA、BHT、TBHQ、EQ和PG的检出限、定量限按附录A执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于

本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4高效液相色谱法(仲裁法)

注意：测定全过程，尽可能避光(或不在强光下)操作。

4.1原理

试样中的BHA、BHT、TBHQ、EQ和PG用乙腈超声提取，高效液相色谱法测定，外标法定量。

4.2试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.2.1水：GB/T6682,一级。

4.2.2乙腈：色谱纯。

4.2.3乙酸：色谱纯。

4.2.42%乙酸溶液：准确移取20mL乙酸(4.2.3),加水稀释至1000mL,摇匀。

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4.2.5标准品：BHA、BHT、TBHQ、PG纯度均不小于98%,EQ纯度不小于95%,具体信息见附录B。4.2.6混合标准储备溶液：分别称取BHA、BHT、TBHQ、EQ100mg和PG50mg(精确至0.01mg)于

100mL棕色容量瓶中，用乙腈(4.2.2)溶解并定容。于2℃~8℃避光保存，有效期为2周。

4.2.7混合标准中间溶液：准确移取混合标准储备溶液(4.2.6)20mL于200mL棕色容量瓶中，用乙腈(4.2.2)定容，使PG浓度为0.05mg/mL,BHA、BHT、TBHQ、EQ浓度为0.1mg/mL。

4.2.8混合标准系列溶液：准确移取适量混合标准中间溶液(4.2.7)于50mL棕色容量瓶中，用乙腈(4.2.2)稀释定容配成混合标准系列溶液，PG的质量浓度分别为：0.50μg/mL、2.00μg/mL、4.00μg/mL、8.00μg/mL、16.0μg/mL、20.0μg/mL和25.0μg/mL;BHA、BHT、TBHQ、EQ的质量浓度分别为1.00μg/mL、4.00μg/mL、8.00μg/mL、16.0μg/mL、32.0μg/mL、40.0μg/mL和50.0μg/mL。临用现配。

4.2.9针式滤器：0.45μm有,机相。

4.2.10微孔滤膜：0.22μm有,机相。4.3仪器设备

4.3.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

4.3.2分析天平：感量0.01mg和1mg4.3.3超声波清洗器。

4.3.4恒温水浴锅。

4.3.5离心机：转速不低于9000r/min。

4.4样品

按GB/T20195制备试样，至少约200g,固体样品粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛，充

分混匀，立即装入密闭容器中，避光保存，备用。液体、膏状样品，立即装入密闭容器中，避光保存，备用。

4.5试验步骤

4.5.1试样溶液的制备

4.5.1.1油脂类试样

平行做两份试验。称取试样5g,精确至1mg,置于250mL具塞三角瓶中(如为凝固状，置65℃水浴中加热7min,使融化),准确加入50mL乙腈，55℃超声提取40min。冷却至室温，取上层溶液20mL于50mL离心管中，9000r/min离心5min(4.3.5),用针式滤器(4.2.9)过滤，滤液再经0.22μm滤膜(4.2.10)过滤，备用。

4.5.1.2其他类试样

平行做两份试验。称取试样5g,精确至1mg,置于250mL具塞三角瓶中，准确加入乙腈(4.2.2)50mL,摇匀，超声提取40min,期间振摇2次～3次。摇匀静置至室温。吸取上述提取液适量，用针式

滤器(4.2.9)过滤，滤液再经0.22μm滤膜(4.2.10)过滤，备用。

4.5.2液相色谱参考条件

液相