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土壤中高产蛋白酶菌株的筛选鉴定及发酵条件优化
耿芳;杨绍青;闫巧娟;刘军;龚思怡;江正强
【摘要】从海南土壤中筛选得到一株高产蛋白酶的菌株,并对其进行菌种鉴定、产
蛋白酶发酵条件优化及蛋白酶分子质量测定.经筛选,得到一株高产蛋白酶的菌株,编
号为CAUH83,蛋白酶活力达到126U/mL.通过形态观察、生理生化试验及16S
rDNA序列分析,鉴定菌株CAUH83为粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens).通过
单因素试验优化,确定该菌株产蛋白酶的最优发酵条件:大豆粉3.0％、蔗糖3.0％、
初始pH6.0、培养温度30℃、培养时间48h.在此优化发酵条件下,该菌株产蛋白
酶酶活力达到1932.3U/mL,较优化前提高15.3倍.通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯
酰胺凝胶电泳(SDS)和酶谱分析表明该蛋白酶分子质量约51kDa.%Astrain
withhighyieldproteasewasisolatedfromsoilsampleofHainan.The
identification,fermentationconditionsoptimizationandmolecularmassof
thestrainweredetermined.Afterscreening,astrainCAUH83withhigh
yieldproteasewasobtainedandtheenzymeactivitywas126U/ml.
Throughmorphologicalobservation,physiologicalandbiochemicaltests
and16SrDNAsequenceanalysis,strainCAUH83wasidentifiedasSerratia
marcescens.Theoptimalfermentationconditionswereoptimizedbysingle
factorexperimentsasfollows:soybeanflour3.0％,sucrose3.0％,initialpH
6.0,culturetemperature30℃andtime48h.Undertheoptimalconditions,
thehighestproteaseactivityofthestrainwas1932.3U/ml,which
increased15.3timeshigherthanthatofbeforeoptimization.The
molecularmassoftheproteasewasabout51kDabySDSand
proteasezymogramanalysis.
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2018(037)004
【总页数】6页(P66-71)
【关键词】粘质沙雷氏菌;筛选鉴定;蛋白酶;发酵条件优化
【作者】耿芳;杨绍青;闫巧娟;刘军;龚思怡;江正强
【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083;中国农业大学
食品科学与营养工程学院,北京100083;中国农业大学工学院,北京100083;中国农
业大学食品科学与营养工程学院,北京100083;中国农业大学食品科学与营养工程
学院,北京100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.3
蛋白酶(protelyticenzymes,EC3.4)是催化肽键水解的一类酶,在食品、饲料、医
药、化工等行业有着广泛的应用［1］。与动、植物来源蛋白酶相比,微生物蛋白酶
具有培养简便、易批量生产等优点［2］,因此,微生物蛋白酶的研究一直备受关注。
大部分商业中性和碱性蛋白酶都来源于细菌,目前,已报道产胞外蛋白酶的细菌种类
很多［3］,常见的有芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Aeruginosa)等。
粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens),是一种革兰氏阴性兼性厌氧菌,主要存在于沿
海盐碱土壤中,能够产生红色非扩散性色素［4］。据报道,粘质沙雷氏菌所产的碱
性蛋白酶不仅可以有效消除芽孢菌酶制剂的弊端,而且还具有一定的抗肿瘤活性
［5］。赵海霞等
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