DB51∕T 2410-2017 应用微卫星DNA标记亚洲黑熊个体司法鉴定技术规范.docxVIP

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DB51

四川省地方标准DB51/T2410—2017

应用微卫星DNA标记亚洲黑熊个体司法鉴定技术规范

2017-09-19发布2017-10-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T2410—2017

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语、定义和缩略语 1

4PCR引物的设计、合成与荧光标记 2

5DNA的提取与检测 2

6PCR反应与PCR产物测序 2

7基因分型 3

8个体识别 3

附录A（规范性附录）亚洲黑熊微卫星标记信息 5

II

DB51/T2410—2017

前言

本标准按GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的规定编写。本标准由四川省林业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准主要起草单位：四川省林业科学研究院。

本标准主要起草人：靳伟毛毳费然夏云刘雯昊。

1

DB51/T2410—2017

应用微卫星DNA标记亚洲黑熊个体司法鉴定技术规范

1范围

本标准规定了利用DNA简单重复序列微卫星分子标记对亚洲黑熊进行司法鉴定的原理、试剂、仪器、分析步骤和结果判定标准。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GA/T383-2002法庭科学DNA实验室检验规范

SN/T1193-2003基因检验实验室技术要求

NY/T1673-2008畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程

3术语、定义和缩略语

下列术语和定义适用于本文件。3.1

微卫星分子标记Microsatellitemarker

微卫星（microsatellite）是指基因组中由1-6个核苷酸为基本重复单元组成的DNA串联重复序列，

例如（AC）n、（ACG）n、（ATTT）n等，也称为短串联重复序列（Shorttandemrepeats，STR）或简单重复序列（Simplesequencesrepeats，SSR）。在个体间重复次数发生变化的多态性微卫星位点，可以作为微卫星标记使用。

3.2

DNA样品DNAsample

是指利用亚洲黑熊组织（如毛发、血液、精液、肌肉组织等）或新鲜粪便提取的亚洲黑熊基因组DNA。

3.3

聚合酶链式反应Polymerasechainreaction,PCR

用一对寡核苷酸引物、四种脱氧核糖核苷酸（dNTPs）为原料，在合适的温度、离子条件和耐热DNA聚合酶催化下，在体外人工合成特异的DNA片段的过程。

3.4

微卫星特异性引物Microsatellitespecificprimers

2

DB51/T2410—2017

用于亚洲黑熊微卫星DNA分子鉴定选用的一套微卫星引物。具有多态性、稳定性、重复性等综合特点。统一推荐使用16个微卫星标记（附录A），其中1-11号为基本标记，12-16号为备选标记，可根据工作目标选用合适数量的微卫星标记。只有当基本标记不够用时，才使用备选标记。

4PCR引物的设计、合成与荧光标记

推荐使用的16个微卫星标记的PCR引物序列设计参见附录A，将序列送有关公司合成，详细记录引物合成的生物公司名称，合成的批次及每个引物标记的颜色，方便后续做系统误差校正。

5DNA的提取与检测

5.1鉴定样品

待鉴定样品可以是皮毛、肌肉、骨骼、各种器官、组织、血液等。

通过现场或实验室取样，将采集到的样品（如：肌肉、肝脏、皮毛等）用蒸馏水洗净后放入盛有95%酒精的离心管中，4℃保存待用。

5.2基因组DNA的提取

把取回样品用蒸馏水洗净后，用标准的SDS变性、蛋白酶K消化和酚／氯仿抽提方法提取总DNA，具体操作参照《分子克隆实验指南（第3版）》等的方法沉淀DNA，收集絮状沉淀，用70%乙醇洗涤两次，室温干燥后加入适量TE溶解DNA。

注：以上为推荐的一种DNA提取方法。其他DNA提取方法若DNA质量能够符合PCR扩增需要的都可用于本标准。

5.3DNA浓度检测

5.3.1紫外吸收定性测试

应保证A260／A280比值在1.8–2.0范围内，方可正常进行后续实验。

5.3.2