小分子酸激酶抑制剂识别药学.pptxVIP

小分子的丙酮酸激酶抑制剂M2的识别;Articlehistory

Received7October2009

Accepted3December2009

;来自不同组织类型的肿瘤产生的一个共同特点是在有氧糖酵解的依赖糖代谢。癌细胞与正常细胞之间的这种代谢差异可以被利用在患者中治疗益处。癌细胞普遍表达糖酵解的M2亚型酶丙酮酸激酶（PKM2），以前的工作已经证明，PKM2表达是必要的,有氧糖酵解和细胞增殖的体内。因为大多数正常组织表达一种比其他PKM2丙酮酸激酶的亚型，PKM2的选择性靶向提供了一个机会，靶细胞的新陈代谢用于癌症治疗。PKM2具有相同的催化位点作为相关M1剪接变种（PKM1）。然而，同种型选择性抑制是可能的，PKM2包含一个独特的区域变构调节。我们已经筛选了超过1,00,000小分子库来识别这样的抑制剂。确定了PKM2抑制剂下跌，主要分为三个不同的结构类型。该最有效的抑制剂PKM2下降导致糖酵解和增加细胞死亡的损失生长因子信号。至少一部分的这种影响是由于在靶PKM2抑制为较少的细胞死亡观察细胞工程，以表达PKM1。这些数据表明了该同种型选择性抑制PKM2与smallmolecules是可行的，并支持该假说，即抑制葡萄糖代谢癌细胞是一种可行的策略来治疗人类的恶性肿瘤。;如何葡萄糖代谢中的一个重要的决定因素细胞依赖于糖酵解酶丙酮酸激酶。丙酮酸激酶有四个亚型在哺乳动物细胞中通过编码两个独立的基因。L基因被选择性剪接到产生丙酮酸激酶的L和R的异构体，它们是在肝脏和红细胞表达排他地。M基因是由一个互斥可变剪接单一的外显子，以产生丙酮酸任M1或M2的同种型激酶。大多数组织中的成年动物明示丙酮酸激酶M1（PKM1），而丙酮酸激酶M2（PKM2）被表示胚胎发育过程中。肿瘤细胞，包括那些从组织源性肿瘤，通常表达PKL或PKR。使用在PKM2RNA干扰显著损害细胞生长在组织培养中，抑制PKM2与肽适体抑制细胞增殖，和PKM2的表达都是必要的有氧糖酵解和体内肿瘤生长。此外，PKM2的选择体内肿瘤生长表明，回归的另一个同种型丙酮酸激酶可能与细胞增殖不相容已建立的肿瘤的设置。这些意见确定PKM2作为在中断有氧糖酵解的一个有吸引力的目标肿瘤。

;用于识别的小分子的一个潜在挑战是选择性抑制PKM2???PKM2和之间的相似性其他亚型丙酮酸激酶。PKM2和PKM1是相同的尺寸和不同之处仅在56个氨基酸区域编码由可变剪接的外显子。相较于PKM1，PKR和PKR不太相似，PKM2，但仍然表现出显著序列保护。PKM2的由所编码的特定部分可变剪接的外显子没有贡献的活性位点酶的，而是允许PKM2，但不是PKM1，要由上游糖酵解中间变构激活，果糖-1,6-双磷酸（FBP）。PKM2的独特区域通过相互作用使得酶调节酪氨酸磷酸化蛋白。靶向PKM2的变构位点可允许的同种型选择性的小分子抑制剂丙酮酸激酶。;在这里，我们描述了旨在确定抑制剂与屏幕选择性PKM2超过PKM1。此屏幕确定了三个班的抑制PKM2与PKM1影响最小的分子。这些分子可以模仿PKM2击倒的一些方面利用RNAi技术，包括抑制糖酵解。这些数据表明PKM2的该选择性靶向与药物样分子是可能的，并且表明，努力目标PKM2可能产生适用于针对癌症代谢的癌症的化合物治疗。;1.重组丙酮酸激酶亚型净化;2.酶活性的表征;测定的示意图用于测量丙酮酸激酶活动。丙酮酸激酶（PK）的反应可以耦合到较快的乳酸脱氢酶（LDH）的反应，和丙酮酸激酶活性，随后通过测量下降的NADH的荧光。另外，ATP所生产的丙酮酸激酶反应可以通过在依赖ATP产生发光来测量萤火虫荧光素酶反应。;PKM2仍然是癌症治疗的一个有吸引力的目标。我们证明PKM2的选择性靶向药物样.分子是可行的,建议PKM2可以与其他靶向疗法抑制,协同。这些化合物将提供一个机会去探索针对癌症细胞新陈代谢。发展的更强PKM2抑制剂,最优策略为癌症治疗使用这些分子仍然是一个令人兴奋和抗癌药物发展的有效区域。;谢谢观赏