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生物技术进展

生物技术进展2023年第13卷第4期596~603CurrentBiotechnologyISSN2095?2341

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重组贻贝粘蛋白的表征及功效评价

李敏，魏文培，乔莎，郝东，周浩，赵硕文，张立峰，侯增淼*

西安德诺海思医疗科技有限公司，西安710000

摘要：为了推进重组贻贝粘蛋白在医疗、化妆品领域的应用，对大肠杆菌规模化发酵及纯化生产获得的重组贻贝粘蛋白进行了表征及功效评价。经Edman降解法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱、PITC法、非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、凝胶法、改良的Arnow法对重组贻贝粘蛋白进行氨基酸N端测序、相对分子量分析、氨基酸组成分析、蛋白纯度分析、内毒素含量测定、多巴含量测定；通过细胞迁移、斑马鱼尾鳍修复效果对重组贻贝粘蛋白进行功效评价。结果显示，获得的重组贻贝粘蛋白与理论的一级结构一致，蛋白纯度达95%以上，内毒素10EU·mg-1,多巴含量大于5%；重组贻贝粘蛋白浓度为60μg·mL-1时能够显著促进细胞增殖的活性（P0.01）；斑马鱼尾鳍面积样品组与模型对照组相比极显著增加（P0.001）。研究结果表明，重组贻贝粘蛋白具有显著的促细胞迁移和修复愈合的功效，具备作为生物医学材料的潜质。

关键词：贻贝粘蛋白；基因重组；生物材料；表征；功效评价DOI：10.19586/j.2095?2341.2023.0021

中图分类号：S985.3+1文献标志码：A

CharacterizationandEfficacyEvaluationofRecombinantMusselAdhesiveProtein

LIMin，WEIWenpei，QIAOSha，HAODong，ZHOUHao，ZHAOShuowen，ZHANGLifeng，HOUZengmiao*

XianDeNovoHithMedicalTechnologyCo.，Ltd，Xian710000，China

Abstract：Inordertopromotetheapplicationofrecombinantmusseladhesiveproteininthemedicalandcosmeticsfield，therecombi?nantmusseladhesiveproteinobtainedfromscalefermentationandpurificationofEscherichiacoliwascharacterizedanditsefficacywasevaluated.AminoacidN-terminalsequencing，relativemolecularweightanalysis，aminoacidcompositionanalysis，proteinpurityanalysis，endotoxincontent，dihydroxyphenylalanine（DOPA）contentofrecombinantmusseladhesiveproteinweredeterminedbythefollowingmethods：Edmandegradation，matrix-assistedlaserdesorptionionizationtime-of-flightmassspectrometry（MALDI-TOF-MS），phenyl-isothiocyanate（PITC），nonreductiveSDS-polyacrylamidegelelectrophoresis（SDS），gelmethod，modifiedAr?now.Theefficacyofrecombinantmusseladhesiveproteinwasevaluatedbycellmigrationandrepairingeffectofzebrafishtailfin.Re?sultsshowedthattheobtainedrecombinantmusseladhesiveproteinwasconfirmedtobeconsistentwiththet