梅毒实验室诊断.ppt

TPPA试验梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)原理

该试验是用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺旋体为抗原包被固相板条，加上梅毒血清和辣根过氧化酶标记的抗人IgG抗体，利用酶免疫法检测患者血清中的抗梅毒螺旋体特异性抗体。采用特异的梅毒螺旋体重组蛋白作为抗原，使试验更加敏感、特异。TP-ELISA材料

a.ELISA试剂盒：含包被梅毒螺旋体抗原的反应板（96孔）；标本稀释液；洗涤液，使用前按说明书要求稀释；酶结合物；底物液（A液和B液）；反应终止液；阳性对照血清；阴性对照血清。

b.其他：酶标检测仪；洗扳机。TP-ELISA方法

a.取标本稀释液100μL加到反应板孔内，再加入待检血清10μL，同时作阳性和阴性对照，置37℃孵育30min。

b.洗涤液洗板5次，拍干；

c.每孔加酶结合物100μL，置37℃孵育15min；

d.洗涤液洗板5次，拍干；

e.每孔加底物液A液、B液各1滴（各50μL），37℃避光孵育15min；

f.每孔加终止液1滴（50μL）终止反应；

g.置酶标检测仪450nm波长测定光密度（OD值）。TP-ELISA结果判定

临界值（cutoff）＝0.10+阴性对照平均OD值（阴性对照OD值0.05时按0.05计算）。标本OD值临界值时，结果为阴性。标本≥临界值，结果为阳性（或按各诊断试剂要求判定结果）。注意事项

a.试剂盒置4～8℃保存；

b.不同批号试剂不能混用；

c.严格按试剂盒说明书要求操作；

d.反应的温度和时间必须严格控制。梅毒免疫层析法－梅毒快速检测（RT）

原理利用免疫色谱原理，采用吸附有显色标记的梅毒螺旋体抗原的滤纸条，快速检测标本中的梅毒螺旋体抗体。梅毒免疫层析快速检测方法测定螺旋体IgM抗体的血清学试验梅毒中特异性的IgM抗体是梅毒感染最早其产生的抗体。在潜伏期以及晚期患者可发现IgM水平在自愈的患者中下降的速度比经过治疗痊愈的患者慢。IgM分子量较大不能通过胎盘屏障。因此在新生儿血中检测到IgM抗体表明有先天感染。如在患者的脑脊液检测到IgM抗体表明有活动性神经梅毒。血液中或脑脊液中出现抗梅毒IgM抗体均表示需要治疗。检测Igm的FTA-ABS试验检测19S-IgM组分的FTA-ABS试验IgM固相层血球吸附试验(SPHA)IgM捕获ELISA免疫印迹试验推荐使用19S-IgM-TPHA试验来诊断先天梅毒。梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义证实试验：体内持续时间：假阳性情况：梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义如系统性红斑狼疮患者血清可使FTA—ABS试验呈假阳，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使TPHA呈假阳性。麻风患者也可使特异试验呈阳性。作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体抗体试验试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不能作为疗效观察、判断复发及再感染的指标。TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。梅毒血清学试验的合理应用非梅毒螺旋体试验阳性可能表示：现症感染、接受或未接受过治疗的近期感染，以及生物学假阳性结果。在一般人群中的假阳性率是1-3%。大部分假阳性血清抗体滴度1∶4，但低滴度不能排除梅毒，可出现在潜伏或晚期梅毒病人中。梅毒螺旋体试验阳性可表示：现症感染；接受或未接受过治疗的近期感染；既往感染。梅毒血清学试验的结果解释试验结果意义TRUST+，TPPA-TRUST假阳性TRUST+，TPPA+现症梅毒、治愈的晚期梅毒(梅毒孕妇所生的婴儿除外)TRUST-，TPPA+极早期梅毒、早期梅毒治愈后TRUST-，TPPA-排除梅毒感染极早期梅毒（尚无任何抗梅毒抗体产生）极晚期梅毒AIDS患者合并感染梅毒非梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图梅毒检测策略TRUST验证TPHA或TPPA或RPR验证TP-ELISA非梅毒螺旋体血清学试验与梅毒螺旋体血清学试验均可以作为梅毒初筛，但阳性必须用另一种方法进行验证，并结合临床，才能诊断