万州零售淡水鱼中副溶血性弧菌污染状况与特征研究.pdf

摘要

副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是一种重要的食源性致病菌，可导致腹泻、

急性肠胃炎和败血症，重症患者可表现为脱水、昏迷、休克甚至死亡，主要存在于海

洋环境和海产品中。但近年来，国内外相继有文献报道在淡水环境和淡水产品中也有

副溶血性弧菌检出。重庆市万州区是我国中西部地区重要的中心城市，处于三峡库区

核心区域，淡水资源丰富、淡水产品资源相对较多，本研究对万州区零售常食五种淡

水鱼进行了污染调查，研究分离株的毒力基因携带情况、血清型、耐药性及分子分型

等表型和遗传型特征。为今后建立副溶血性弧菌的防控技术、促进水产养殖稳定发展

和保障人们健康具有重要意义。本研究主要内容和结果如下：

（1）副溶血性弧菌污染情况调查研究。

2022年3月—2023年2月，从万州区零售环节的各大型超市，按随机采样原则

采集五种鲜活淡水鱼（草鱼、鳙鱼、鲫鱼、黄颡鱼、武昌鱼）共计141份，其中有54

份检出副溶血性弧菌，总污染率为38.3%，定量检测均值为20.8MPN/g。五种淡水鱼

均存在副溶血性弧菌污染，鳙鱼污染率最高，为66.7%，草鱼污染率最低，为25.0%。

不同季节检出率不同，夏季检出率最高，为57.1%，冬季检出率最低，为10.0%。

（2）副溶血性弧菌致病特性研究。

采用PCR法检测副溶血性弧菌毒力基因。54株副溶血性弧菌均携带tox-R和

T3SS1基因，在分离株中检测到1株携带tdh并同时携带T3SS2毒力基因的副溶血

性弧菌，占所有分离株的1.8%，没有发现携带trh、pirA和T3SS2毒力基因的分离

株。采用多重PCR检测血清型。54株副溶血性弧菌有1株无法区分血清型，其他53

株共分为9个O群，O1群菌株数最多，占总的33.3%，其次是O2、O3/O13和O11，

各占14.8%，O6和O10最少，各占1.9%，未检测到属于O4、O8和O12血清群的分

离株。利用结晶紫染色法对54株副溶血性弧菌的生物膜进行测定。生物膜形成能力

与温度有关，在4℃、25℃和37℃下，约38.9%、70.4%和81.5%的菌株形成了生物

膜，表明随着温度的升高，副溶血性弧菌形成生物膜能力逐渐增强，在25℃时，弱生

物膜形成最高，仅有一株菌在37℃形成了强的生物膜。

（3）副溶血性弧菌耐药性检测分析。

采用纸片扩散法对54株副溶血性弧菌进行药敏试验。所有分离株对头孢他啶、

头孢曲松、庆大霉素、四环素、多西环素和米诺环素敏感，耐药率较高的抗生素依次

是苯唑西林（100.0%）、青霉素（98.1%）、氨苄西林（90.7%）和羧苄西林（85.2%），

此外81.5%的分离株对红霉素可产生中介耐药。耐1类抗生素的分离株占64.8%，耐

2类抗生素及以上的分离株占35.2%，其中仅有1株耐4类7种抗生素。54株副溶血

性弧菌携带耐药基因率较低，12种耐药基因中只检出blaTEM、blaCARB和blaCTX-M3种

耐药基因，有51株菌含有耐药基因blaTEM，有22株菌都含有耐药基因blaCARB和

blaCTX-M。

（4）副溶血性弧菌ERIC-PCR分型。

对分离的54株副溶血性弧菌和1株临床来源的副溶血性弧菌进行肠杆菌科基因

组间重复序列分型。菌株相似度在53%~100%，设置相似系数为75%时，所有分离株

可分为8个类群（E1~E8），其中，E1聚类最大，含26个淡水分离株和1个临床来源

株（178）。淡水分离株（VP42）和临床分离株（178）被聚类在一个分支中，表现出

相同的ERIC型，说明这两株菌的亲缘关系较近，可能来自同一克隆系，同时它们都

携带致病的tdh毒力基因，表明VP42可能具有与临床源菌株相同的致病性，需要引

起重视。

关键词：副溶血性弧菌淡水鱼毒力基因耐药性ERIC-PCR

Abstract

Vibrioparahaemolyticusisanimportantfood-bornepathogenthatcancausediarrhea,

acutegastroenteritis,a