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《生物分离提取技术》习题及答案
1.认识生物分离提取技术
生物分离与纯化的目的？
生物分离与纯化的目的是从微生物发酵液，酶反应产物，动植物细胞培养和生物体本身分离并纯化对人类有用的，符合质量要求的各种生物药物和生物制品。
生物物质的来源？
（1）动物器官与组织（2）植物器官与组织（3）微生物及其代谢产物（4）细胞培养产物（5）血液、分泌物及其它代谢物
3.生化分离技术的主要种类？
种类：细胞破碎、沉淀分离、膜过滤、层析分离、电泳分离、离心分离。
4.生物分离技术的特点是什么？
（1）目的产物浓度低，纯化难度大（2）活性物质性质不稳定，操作过程容易失活（3）生物材料中生化组分数量大，分离困难（4）生物材料易变质，保存困难（5）生物产品的质量标准高
5.生化分离的主要步骤？
（1）选材：来源丰富，含量相对较高，杂质尽可能少
（2）提取：将目的物从材料中以溶解状态释放出来，方法与存在部位及状态有关。
（3）分离纯化：核心操作，须据目的物的理化性质，生物学性质及具体条件定。
（4）浓缩、结晶、干燥。
（5）保存：整个过程应有快速灵敏准确的分析方法来衡量效果（收率、纯度）。
5.指出胞内产物和胞外产物的分离纯化流程不同之处？
胞内产物需要破壁的过程：需要将目的物从胞内转移到外界溶液中，需要细胞提取物破碎、匀浆、离心，如果是液体的话，获得提取液，如果是想获得固体目的物，就对沉淀进行洗涤再获得提取物。
2.发酵液的预处理
发酵液预处理的目的是什么？
（1）改善发酵液的物理性质：流变性质、颗粒粒度；
（2）尽可能使产物转入便于后处理的某一相中（多数是液相）；
（3）去除部分杂质：杂蛋白、多糖、高价无机离子等。
2、发酵液预处理降低液体黏度常用的方法？
（1）加热（2）凝聚和絮凝（3）变性沉淀（4）调节PH
3.何谓凝聚？其作用机理是什么（加入电解质凝聚剂的目的）？
凝聚：凝聚是在高价无机盐作用下，由于经典排斥力的降低，而使胶体体系不稳定的现象。
作用机理：发酵液中的细胞，菌体或蛋白质等胶体粒子表面都带有同种电荷，使得这些胶体粒子之间相互排斥，保持一定距离而不互相凝聚。另外，这些胶体粒子和水有高度的亲和性，其表面很容易吸住水分，形成一层水膜，从而使胶体粒子呈分散状态。在发酵液中加入电解质，就能中和胶体粒子的电性，夺取胶体粒子表面的水分子，破坏其表面的水膜，从而使胶体粒子能直接碰撞而聚集起来。
4.何谓絮凝？其作用机理是什么？
絮凝：是指在某些高分子絮凝剂存在下，基于架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理的集合为主的过程。
作用机理：絮凝剂一般为高分子聚合物，具有长链线状结构，容易溶于水，其相对分子质量高达数万至1000万以上，在长的链节上含有相当多的活性功能团。絮凝剂的功能团能强烈地吸附在胶粒的表面，由于一个高分子絮凝剂的长链节上含有相当多的活性功能团，所以一个絮凝剂分子可分别吸附在不同颗粒的表面，从而产生架桥链接。
5.絮凝的主要影响因素
絮凝的影响因素：主要是絮凝剂的相对分子质量和种类、絮凝剂用量、溶液的PH、搅拌速度和时间等。
6.除去发酵液中杂蛋白质的常用方法有哪些？
（1）沉淀法（2）变性法（3）吸附法
7.发酵液中不溶性多糖怎样去除？
当发酵液中含有较多不溶性多糖时，黏度增大，固液分离困难，可用酶将其转化为单糖。
3.细胞破碎技术
1.细胞破碎就是采用一定的方法，在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术，是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质（产品）的基础。
细胞破碎常用的技术？
（1）高压匀浆法（2）高速珠磨法（3）超声波法（4）化学法（5）酶解法（6）渗透压冲击法（7）冻结-融化法（8）干燥法
常用的溶酶：溶菌酶、透明质酸酶、蛋白酶、脂肪酶、核酸酶等。
高压匀浆法的原理？
细胞悬浮液在高压作用下从阀座与阀之间的环隙高速喷出后撞击到碰撞环上，细胞在受到高速撞击后，几句释放到低压环境，从而在撞击力和剪切力等综合作用下破碎
影响因素：压力、循环操作次数和温度
化学渗透法破碎细胞的特点？
速度低，效率差，且化学或生化试剂的添加形成新的污染，但化学渗透法选择性高，胞内产物的总释放率低，可有效抑制核酸的释放，料液粘度小，有利于后处理。?
珠磨法破碎细胞的影响因素有哪些？
搅拌速度、料液的循环速度、细胞悬浮液的浓度、珠粒大小和数量、温度等。
6.简要说明常用细胞破碎的主要方法、原理、特点及适用范围？
答：常用的细胞破碎方法有：组织捣碎、珠磨法、高速匀浆法、挤压法、超声破碎法、酶溶法、化学渗透法、干燥法等。
（1）组织捣碎，其原理是利用机械运动产生剪切力的作用破细胞，利用高速旋转的叶片所产生的剪切力将组织细胞破碎。（10000～20000r/min）；适用范围：动植物组织。
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