p27KIP1基因在肝细胞有癌组织中（的表达及其对肝癌细胞的细胞周期和凋...pdf

中文摘要

ｐ２７Ｋｍｌ基因在肝细胞肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞

的细胞周期和凋亡的调控作用

博士研究生郑建勇

导师李开宗教授

摘要

（细胞周期和细胞凋亡的调控在肿瘤的发生、发展和治疗中具有重要

的意义。探索细胞周期和细胞凋亡的调控机制将为肿瘤的治疗提供新的

理论依据。肝细胞肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率居恶性

肿瘤发病率的第三位，死亡率居第二位。肝癌的手术切除复发率高，放

疗和化疗敏感性低，免疫治疗和介入治疗效果均不理想。随着分子生物

学的发展，肿瘤的基因治疗已经成为理想的治疗手段。

ｐ２７“”是一种细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白，通过与各种ｃｙｃｌｉｎ．

ＣＤＫ复合物的相互作用，并抑制它们的活性，促使细胞周期停滞于Ｇ。

期，从而实现对细胞周期的负调控作用。最新研究发现ｐ２７“”能够诱

导细胞凋亡。广一石

本文旨在探讨ｐ２７“”基因的表达与肝细胞肝癌发生、发展的关系，

并研究ｐ２７““基因对肝癌细胞的绁胞周期和绁胞凋亡的潜在调节作用，

为肝细胞肝癌的基因治疗提供实验材料和理论依据。庠研究的主要内容

和结果如下：

１．利用ＤＮＡ缺口末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学方法，检

测３３例肝细胞肝癌中凋亡和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。凋

亡阳性细胞为胞核呈兰紫色颗粒，ＰＣＮＡ染色阳性为细胞核呈棕黄

色颗粒状。肝癌组织的凋亡指数ＡＩ（Ｏ．４０）和ＰＣＮＡ指数ＰＩ（２６

７５）

第四军医大学博士学位论文中文摘要

都明显高于癌旁肝组织的ＡＩ（０１１）和ＰＩ（７．６３），并且在包膜受侵犯者

及低分化的癌组织中ＡＩ和ＰＩ都明显增高，此外，增殖越迅速的癌

组织，其凋亡的发生也就越高。

２．应用免疫组织化学和ｍＲＮＡ原位杂交方法，对５２例肝细胞肝癌中

ｐ２７“…蛋白和ｍＲＮＡ的表达进行了检测。结果显示ｐ２７“”基因的表

达主要位于肝或肝癌细胞的胞核中，呈细颗粒状分布。ｐ２７“”蛋白

在癌旁肝组织中的阳性细胞指数（１０７±７６）明显高于癌组织（１５

±０．９），并且ｐ２７“”表达的阳性细胞指数与ＨＣＣ细胞的分化程度

呈正相关，而ｐ２７ＫＩＰｌｍＲＮＡ杂交阳性物呈兰色细颗粒状，主要位于

肝或肝癌细胞的胞核和胞浆中，ｍＲＮＡ阳性的细胞分布更广泛，但

在癌旁肝组织和不同分级的ＨＣＣ组织中ｐ２７ＫＩＰＩｍＲＮＡ的阳性细胞指

数无明显差异。

３．采用一种可诱导性表达系统，ＭＴ．ＩＩ调节系统，构建了可诱导性真

核表达载体ｐＭＤ—ＫＩＰｌ与ｐＭＤ—ＧＦＰ，经酶切鉴定证明载体构建正确。

４．通过脂质体转染法将ｐ２７“”全长ｅＤＮＡ转入肝癌细胞系ＨＣＣ一９２０４中，

观察ｐ２７““的过表达对肝癌细胞的恶性表型和细胞凋亡的影响。结

果显示ｐ２７““能够显著地抑制肿瘤细胞的生长，台盼蓝拒染实验显

示在外加ｚｎ离子４８ｈ时细胞生长被抑制３５％；软琼脂克隆形成率明

显少于亲代细胞；ｐ２７““的过表达能够显著地增加Ｇ．期的细胞数，

由３５．２１％增加到７６．２６％。并且ｐ２７““过表达的细胞出现典型”ＤＮＡ

Ｌａｄｄｅｒ”：其凋亡指数也显著增加；这些细胞在Ｇ．期前出现一个亚二

倍体的凋亡峰。

Ｌ，口一一

以■研究阐明了ｐ２７“”在肝癌的发生、发展中的作用；证明了ｐ２７““

基因能够使ＨＣＣ－９２０４细胞系的Ｇ，期延长并导致细胞凋亡。从而提示

ｐ２７““基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因。

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