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中文摘要
p27Kml基因在肝细胞肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞
的细胞周期和凋亡的调控作用
博士研究生郑建勇
导师李开宗教授
摘要
(细胞周期和细胞凋亡的调控在肿瘤的发生、发展和治疗中具有重要
的意义。探索细胞周期和细胞凋亡的调控机制将为肿瘤的治疗提供新的
理论依据。肝细胞肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发病率居恶性
肿瘤发病率的第三位,死亡率居第二位。肝癌的手术切除复发率高,放
疗和化疗敏感性低,免疫治疗和介入治疗效果均不理想。随着分子生物
学的发展,肿瘤的基因治疗已经成为理想的治疗手段。
p27“”是一种细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白,通过与各种cyclin.
CDK复合物的相互作用,并抑制它们的活性,促使细胞周期停滞于G。
期,从而实现对细胞周期的负调控作用。最新研究发现p27“”能够诱
导细胞凋亡。广一石
本文旨在探讨p27“”基因的表达与肝细胞肝癌发生、发展的关系,
并研究p27““基因对肝癌细胞的绁胞周期和绁胞凋亡的潜在调节作用,
为肝细胞肝癌的基因治疗提供实验材料和理论依据。庠研究的主要内容
和结果如下:
1.利用DNA缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组织化学方法,检
测33例肝细胞肝癌中凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。凋
亡阳性细胞为胞核呈兰紫色颗粒,PCNA染色阳性为细胞核呈棕黄
色颗粒状。肝癌组织的凋亡指数AI(O.40)和PCNA指数PI(26
75)
第四军医大学博士学位论文中文摘要
都明显高于癌旁肝组织的AI(011)和PI(7.63),并且在包膜受侵犯者
及低分化的癌组织中AI和PI都明显增高,此外,增殖越迅速的癌
组织,其凋亡的发生也就越高。
2.应用免疫组织化学和mRNA原位杂交方法,对52例肝细胞肝癌中
p27“…蛋白和mRNA的表达进行了检测。结果显示p27“”基因的表
达主要位于肝或肝癌细胞的胞核中,呈细颗粒状分布。p27“”蛋白
在癌旁肝组织中的阳性细胞指数(107±76)明显高于癌组织(15
±0.9),并且p27“”表达的阳性细胞指数与HCC细胞的分化程度
呈正相关,而p27KIPlmRNA杂交阳性物呈兰色细颗粒状,主要位于
肝或肝癌细胞的胞核和胞浆中,mRNA阳性的细胞分布更广泛,但
在癌旁肝组织和不同分级的HCC组织中p27KIPImRNA的阳性细胞指
数无明显差异。
3.采用一种可诱导性表达系统,MT.II调节系统,构建了可诱导性真
核表达载体pMD—KIPl与pMD—GFP,经酶切鉴定证明载体构建正确。
4.通过脂质体转染法将p27“”全长eDNA转入肝癌细胞系HCC一9204中,
观察p27““的过表达对肝癌细胞的恶性表型和细胞凋亡的影响。结
果显示p27““能够显著地抑制肿瘤细胞的生长,台盼蓝拒染实验显
示在外加zn离子48h时细胞生长被抑制35%;软琼脂克隆形成率明
显少于亲代细胞;p27““的过表达能够显著地增加G.期的细胞数,
由35.21%增加到76.26%。并且p27““过表达的细胞出现典型”DNA
Ladder”:其凋亡指数也显著增加;这些细胞在G.期前出现一个亚二
倍体的凋亡峰。
L,口一一
以■研究阐明了p27“”在肝癌的发生、发展中的作用;证明了p27““
基因能够使HCC-9204细胞系的G,期延长并导致细胞凋亡。从而提示
p27““基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因。
4
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