组织学技术特殊染色.ppt

4、染色程序（1）切片脱蜡至水；（2）入0.5%碘乙醇5-10min，自来水洗，蒸馏水洗；（3）入0.5%硫代硫酸钠3-5min；（4）Weigert铁苏木精10-20min，自来水洗；（5）1%盐酸乙醇分化，自来水洗蓝化；第41页,共52页，星期六，2024年，5月（6）入丽春红酸性品红液3-5min，蒸馏水速洗；（7）入1%磷酸钼水溶液5min；（8）倾去磷酸钼，直接用2%亮绿液染3-5min；（9）0.5%冰醋酸冲洗切片，将亮绿全部洗掉；（10）95%乙醇，无水酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。第42页,共52页，星期六，2024年，5月5、结果A细胞染成红色，位于胰岛周边；B细胞染成紫红色，位于胰岛中央；D细胞染成绿色，位于A细胞与B细胞之间。6、注意用10%甲醛固定，再用重铬酸钾液处理，也获得较好效果。第43页,共52页，星期六，2024年，5月第44页,共52页，星期六，2024年，5月甲绿-派若宁染色显示DNA和RNA染色原理：甲绿和派若宁是碱性染料，染色中甲绿-派若宁染色与DNA和RNA的聚合程度有关。甲绿与聚合程度高的DNA亲和力较强；派若宁与聚合程度低的RNA有亲和力。一、固定Zenker\Carnoy(4℃)第45页,共52页，星期六，2024年，5月二、染液配制1、2%甲绿水溶液：甲绿2g，蒸馏水100ml※甲绿提纯法：将甲绿溶解后，放入分液漏斗中，加等量的纯氯仿洗，充分摇荡数分钟，静置，待液体分层，放掉下层紫色氯仿液。按此法反复洗，直至洗不下紫色为止，需洗5次左右。4℃保存。2、2%派若宁水溶液：派若宁2g，蒸馏水100ml此液提纯，应按甲绿方法进行。第46页,共52页，星期六，2024年，5月3、醋酸缓冲液（pH值4.8）：0.2mol/L醋酸41ml，0.2mol/L醋酸钠59ml。4、甲绿-派若宁染液：2%甲绿提纯液7.5ml，2%派若宁提纯液12.5ml，醋酸缓冲液30ml。此液用前配制。第47页,共52页，星期六，2024年，5月三、染色程序1、切片脱蜡入水；2、切片入甲绿-派若宁染液5-10min；3、滤纸快速吸干，纯丙酮速洗分色；4、丙酮二甲苯混合液（1:1）速洗2次5、二甲苯透明，树胶封固。四、染色结果DNA呈蓝绿色，RNA呈红色。第48页,共52页，星期六，2024年，5月※苏木精本身不是染料，不能单独使用，因为对组织的亲和力很小。苏木精必须氧化成苏木红才能染色，常用的氧化剂如：氧化汞、过锰酸钾、碘酸钠、重铬酸钾。氧化的苏木精脱掉二个原子的氢。也可用无水乙醇配成10%干液，使其自然成熟。氧化的苏木精为弱酸性，pH为6.5。氧化后的苏木精还必须加入电解质，如铁矾、銨矾、钾矾等即变成带有强电荷的碱性染料。Mayer–苏木精：苏木精1g蒸馏水1000ml碘酸钠0.2g甲矾50g加温溶解成紫蓝色，加水化氯醛50g及枸橼酸1g，溶液变成红紫色，可长久保存。第49页,共52页，星期六，2024年，5月第50页,共52页，星期六，2024年，5月内弹性膜内膜中膜外膜第51页,共52页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第52页,共52页，星期六，2024年，5月3、对照用1%淀粉糖化酶处理对照片20min.或用唾液（无气泡）消化对照片30min2次。4、结果细胞内糖原呈紫红色；对照片为阴性第9页,共52页，星期六，2024年，5月5、注意事项：（1）糖原易溶于水，要用冷Carnoy液固定（2）配制Schiff试剂碱性品红杂质太多，或亚硫酸氢纳潮解，都不能使碱性