DB34T 3649-2020 水产品中磺胺类药物残留量的测定 酶联免疫吸附法　　.docx

ICS65.150B52

DB34

安徽省地方标准DB34/T3649—2020

水产品中磺胺类药物残留量的测定酶联免疫吸附法

DeterminationofresiduesofsulfonamidesinaquaticProductsELISAmethod

2020-06-22发布2020-07-22实施

安徽省市场监督管理局发布

I

DB34/T3649—2020

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省水产技术推广总站提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽国泰众信检测技术有限公司、宁国市金东坊农业开发有限公司、宣城市金水源水产专业合作社、安徽省水产技术推广总站、合肥市畜牧水产技术推广中心、北京柏奥泰科技有限公司、合肥金荣生态农业有限公司。

本标准主要起草人：孙德祥、陈洪周、周作友、吴敏、王婷、何广、李瑞、卞红正、许世富、张武庆、姚杰、李先锋、桂淦、郭恒心、魏泽能、荣朝振、刘传涛、魏涛、钱之云、金家红、刘卫芳、王振、何超、范希芹、李珺、陈恩全。

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DB34/T3649—2020

水产品中磺胺类药物残留量的测定酶联免疫吸附法

1范围

本标准规定了水产品中磺胺类药物残留量的测定酶联免疫吸附法的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备与保存、测定方法、检测限、准确度和精密度、结果确证。

本标准适用于水产品中磺胺甲噁唑、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺氯哒嗪残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T30891水产品抽样规范

农业部1077号公告-1-2008水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

农业部1192号公告-1-2009水产苗种违禁药物抽检技术规范

3原理

试样中残留的磺胺类药物、酶标记抗原竞争结合磺胺类药物抗体，同时，磺胺类药物抗体又与微孔板上包被的磺胺类药物的二抗结合，加TMB底物后的颜色与试样中磺胺类药物的含量成反比，用酶标仪在450nm处测定吸光度值，以标准曲线算得对应试样中磺胺类药物浓度，乘以最终试液体积，除以最终试样质量，即得到含量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯；用水应符合GB/T6682规定的二级水。4.1乙腈：色谱纯。

4.2乙酸乙酯：色谱纯。4.3正己烷：色谱纯。

4.4乙腈水溶液：按84mL乙腈：16mL水混合。

4.5氯化钠溶液[2mol/L]：称取11.69g氯化钠，用水溶解并定容至100mL。4.6磺胺类药物测定试剂盒：

——2℃~8℃保存，组成参见附录A。

4.6.196孔酶标板：包被有抗磺胺类药物抗体的捕获抗体（二抗），8孔/条×12条

4.6.2系列标准工作溶液：

——0ng/mL，0.5ng/mL，1.5ng/mL，5.0ng/mL，15ng/mL，50ng/mL

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DB34/T3649—2020

4.6.3磺胺类药物抗体工作液

4.6.4HRP标记的磺胺类药物抗原工作液

4.6.510倍样品提取液

4.6.620倍浓缩洗涤液

4.6.7TMB底物4.6.8终止液

4.7样品提取液：

——按10倍样品提取液（4.6.5）：水（V/V）=1:9进行稀释。——2℃~8℃保存，有效期1个月。

4.8洗涤液：

——按20倍浓缩洗涤液（4.6.6）：水（V/V）=1:19进行稀释。——2℃~8℃保存，有效期1个月。

5仪器和设备

5.1酶标仪：配备450nm滤光片。5.2分析天平：感量0.01g。

5.3组织捣碎机。5.4漩涡仪。

5.5振荡器或超声波。

5.6离心机：离心力≥4000g。

5.7氮气吹干装置：温控范围：室温～100℃。

5.8恒温培养箱：温控范围：0℃~60℃,温度均匀度：±0.5℃5.9可调移液器：

——单道20μL～200μL、100μL～1000μL、500μL～5000μL；——八