“种子萌发前后蛋白质含量的变化分析”生化实验报告.pdf

种子萌发前后蛋白质含量的变化分析

操作人：XXX时间：XXXX.XX.XX地点：XXXX温度：16℃

实验目的：

1、研究种子在萌发前后蛋白质含量的变化，探究萌发过程中各生理指标的动态

变化与植物存在何种关系，进而更深一层了解种子萌发的过程。

2、掌握蛋白质含量的测定方法。

3、掌握分光光度计的原理及使用方法。

4、理解标准曲线的意义及标准曲线的制作方法。

实验原理：

（1）在碱性条件下，蛋白质中的双缩脲与铜离子作用生成双缩脲络合物（下

图）。

（2）此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸（Folin试剂）还原，混合物深蓝色（磷

钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。

试验方法与过程：

1、配制具浓度梯度的标准蛋白质溶液：按下表在试管中加入相应体积的标准牛

血清白蛋白和水，标记相对应的编号。

实验编号

试剂

01122334455

标准牛血清白蛋白

/0.20.20.40.40.60.60.80.81.01.0

（ml）

水（ml）1.00.80.80.60.60.40.40.20.2//

2、目的溶液的制备：

①取休眠和萌发的种子各十颗，分别加入2ml1%NaCl溶液和少量石英砂

于研钵中，充分研磨成匀浆。

②用1%NaCl溶液定容至50ML，摇匀，待再次静止。

③取两只2ml的离心管，每管加入1.5ml静置后的溶液，10000rpm离心

3min，取上清液备用。

④取4个试管，分别编号为休眠1，休眠2，萌发1，萌发2，分别加入

对应离心后的上清液1ml。

3、与碱性铜反应形成螯合物和显色反应

①在15只试管中分别加入5ml碱性铜，室温放置10min。

②在15只试管中分别加入0.5mlFolin试剂，室温放置20min。

4、测OD值：将15只试管中的溶液倒入比色皿，分别测定650nm波长下的

OD值并记录。

2

5、绘制标准曲线：用Excel绘制标准曲线，并求得标准曲线回归方程及R值。

统计分析标准牛血清白蛋白溶液浓度与OD值是否有显著线性回归关系。

原始数据：

1、小麦萌发三天的芽长，附图片在在：

小麦种子编号12345678910

芽长（cm）0.400.500.500.550.500.450.400.400.400.45

2、福林酚法测定标准牛血清白蛋白溶液OD值及绘制标准曲线

不同浓度标准牛血清白蛋白溶液OD值

试管号浓度C（μg/ml）OD值

000.001

1500.232

1500.217

21000.438

21000.413

31500.569