流式细胞术原理及应用(新).pptVIP

流式细胞术与白血病免疫分型流式细胞的免疫分型:是白血病分型的重要指标,而白血病分类是选择化疗方案和判断预后的重要依据。FAB标准(MICM),形态学、免疫表型染色体、分子生物学结合,适合于白血病的分型诊断,但不适合用于确诊是不是白血病。Minimalresidualdiseases(MRD)抗体标记的方法抗体的选择首选直接标记抗体荧光分子PE最强,适用于弱表达抗原FITC最便宜,适用于强表达抗原间接标记适用范围广,biotin-avidin不适合弱抗原的检测数据处理系统流式细胞分析的信息Forwardscatter(FSC)Sidescatter(SSC)FL1-FITCFL2-PEFL3-PerCPPL4-APC流式细胞的基本信息:“形态”流式细胞的主要信息:FluorescenceFL1FL2FL3FL4最常用的标记方法是荧光素分子标记的抗体与细胞抗原结合Gating

常用术语流式常见图形(HistogramPlot)直方图适用于:单参数分析流式常见图形(DotPlot)散点图适用于:多参数分析流式应用常见范围细胞大小细胞的颗粒度细胞表面分子:CD系列细胞浆内分子:胞内细胞因子细胞核内分子:P53细胞功能检测:细胞周期、凋亡其他（膜电位、钙离子浓度、核酸等）实验对照的设计空白对照:ALL阴性对照:常用同型抗体对照单色分析:设同型抗体对照多色分析:同型对照，单阳性对照（用于仪器校正）阳性对照:检测阴性时实验标本的处理单细胞悬液的制备:物理法（剪碎法、网搓法、研磨粉）化学法（酶消化）抗体或标记分子的染色:抗原抗体反应非特异结合的去除:洗涤和封闭封闭－－血清和同型抗体可用流式细胞仪分析的标本外周血、骨髓、癌组织、癌旁组织、石蜡切片、各种体液（尿、脑脊液、胸腹水等）单细胞生物、特殊处理的植物细胞、某些非细胞粒子、可溶性分子待测标本处理成单event悬液荧光素标记的单抗染色鞘液经处理的细胞单个通过激光聚焦区检测散射光、荧光信号转化、放大计算机数据处理分选SORTING（细胞分选）分选速度分选纯度分选收获率流式细胞术的应用细胞死亡分两种:凋亡和坏死细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用；它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞发生凋亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，借用希腊“Apoptosis”来表示，意思是像树叶或花的自然凋落，可译为细胞凋亡。

（一）凋亡的检测细胞凋亡与坏死的区别

虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似，但它们的过程与表现却有很大差别。

坏死（necrosis）:坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢，DNA降解不充分，引起局部严重的炎症反应。

凋亡是细胞对环境的生理性、病理性刺激信号，环境条件的变化或缓和性损伤产生的应答有序变化的死亡过程。其细胞及组织的变化与坏死有明显的不同。

细胞凋亡的生物学意义胚胎形成、肌体正常发育、衰老和损伤细胞的清除以及肿瘤的发生、发展和转归等都与细胞凋亡有关。生物医学的研究热点凋亡检测

每一步都有检测试剂盒每一步都有检测试剂盒1、半胱氨酸蛋白酶3检测法（早早期）2、Ann