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动物遗传学实验
实验七鸡基因组的PCR-RFLP分析
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一、实验方法
1、鸡基因组DNA的提取
2、目的基因的PCR扩增
3、内切酶消化PCR产物
4、琼脂糖凝胶电泳〔检测基
因型〕
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鸡DNA的获取
1、鸡翅下静脉采集全血；
2%EDTA抗凝；
2、DNA提取：
裂解细胞核〔红细胞+白
细胞〕
酚-氯仿去除蛋白质
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酶解RNA
PCR扩增
1、引物设计〔Genbank〕；
2、聚合酶链反响〔
polymerasechainreaction，
PCR〕
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PCR反响体系
DNA模板
dNTP
TaqDNA聚合酶
引物
Mg2
缓冲液
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PCR反响程序
预变性94℃3~5min
35循环：
变性94℃
30s~1min
退火50~65℃
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30~60s
PCR产物电泳检测结果
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内切酶消化PCR产物
PCR产物+缓冲液+内切酶
5‘-TCATGA-3’
3’-AGTACT-5’
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电泳检测基因〔1〕
A
B
电泳图谱
电泳图谱AABBAB
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电泳检测基因〔2〕
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实际操作环节
琼脂糖凝胶电泳检测基因型
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二、实验原理
电荷效应：DNA分子在高于其等电点的
pH溶液中带负电荷，在电场中向正极
移动。
分子筛效应：与分子大小及构象有关，由
于DNA分子或DNA片段的分子量差异，
电泳后呈现迁移位置的差异。
条带类型对应于基因型。
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三、实验目的
通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电
泳技术、DNA的别离鉴定及基因型判
定方法。
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四、实验材料、仪器和试剂
Ø材料：DNA样品
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