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实验五聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳别离血清蛋白

实验五聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳别离血清蛋白

(PolyacrylamideGelElectrophoresis,PAGE)

(PolyacrylamideGelElectrophoresis,PAGE)

动物医学院动物生化教研室

精选ppt1

一、实验目的

①掌握聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的原理；

②学习聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的操作技术；

③了解血清蛋白的主要成份。

精选ppt2

二、实验原理

Ø不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白样品通过浓缩胶的浓缩按分子大小

排列成层，然后进入别离胶，随着电泳的不断进行，不同大小、电荷的蛋白质

分子逐渐被分开。

精选ppt3

1、聚丙烯酰胺凝胶生成

TEMED催化AP生成硫酸自由基

催化Acr聚合成长链

Bis将单体长链连成网状结构

Acr：丙烯酰胺

Bis：甲叉双丙烯酰胺

AP：过硫酸胺〔催化剂〕

TEMEDN,N,N′,N′-四甲基乙二胺〔

加速剂〕

Acr、Bis决定孔径大小

AP、TEMED决定聚合速度

精选ppt4

2、连续胶和不连续胶电泳

n连续胶电泳

n采用相同孔径的凝胶和相同的缓冲系统〔样品缓冲液、凝胶

缓冲液

n和电极缓冲液〕，在pH恒定、离子强度相同的条件下进行。

n优点

n制胶简单、快捷

n缓冲液pH值恒定，可以防止样品进胶后因pH值改变发生的凝聚和

沉淀

n缓冲系统组成简单，来源广泛

n缺点

精选ppt5

n不连续胶电泳

n采用不相同孔径的凝胶和不同缓冲系统的电泳方式，在电泳

别离过程中，由

n于浓缩胶的堆积作用，可使样品在浓缩胶和别离胶界面上先浓缩

成一窄带，然后

n在一定浓度或浓度梯度的凝胶上进行别离。

n优点

n分辨率高

n用于复杂和特殊样品的别离

精选ppt6

l不连续电泳的四种不连续体系

Ø凝胶的不连续

Ø缓冲液成份的不连续

Ø缓冲液pH值的不连续

Ø电压梯度的不连续

l不连续电泳的三种物理效应

Ø样品的浓缩效应

Ø凝胶的分子筛效应

Ø电荷效应

电泳的过程三种效应同时存在，对蛋白样品起协同作用，

使样品各组分按照带电量、分子质量及形状按一定的顺序别

离。

精选ppt7

三、实验步骤

n封槽

n清洁、枯燥的小玻管一端，用Parafilm贴封后

垂直放在管架上

精选ppt8

制胶和灌胶

n别离胶：A:C:D:E＝1:2:3:2〔V/V〕

n浓缩胶：B:C:D:E＝2:1:5:2