原创力文档- 1、本文档共13页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
生物化学实验
生物化学实验
酵母核糖核酸的别离及组分鉴定
精选ppt
5’
3’
5’
3’
精选ppt
一、实验目的
1.掌握RNA的提取方
2.学会使用地衣酚法测定RNA的含量
3.熟悉和掌握离心机的使用方
精选ppt
二、实验原理
l由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、
去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯
酚处理并离心后，RNA即溶于上层被苯酚饱和的水相中，DNA和蛋白质那
么留在苯酚层中，向水层参加乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出。此法
能较好地除去DNA和蛋白质，提取的RNA具有生物活性。
l酵母细胞富含核酸，且核酸主要是RNA，含量为干菌体的2.67%-10.0%，
而DNA含量较少，仅为0.03%-0.516%。为此提取RNA多以酵母为原料。工
业上制备RNA多项选择用低本钱、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法。这
两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备单核苷酸的原料，
其工艺比较简单。
精选ppt
二、实验原理
l稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白
质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。提取的
RNA有不同程度的降解。浓盐法是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改
变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
lRNA含有核糖、嘌呤碱/嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解，从
水解液中可用定糖，加钼酸铵沉淀〔或用定磷法〕和加银沉淀等方法测出
上述组份的存在。〔1〕嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化合物沉
淀。〔2〕地衣酚显色法：核糖核酸与浓盐酸共热时，即发生降解，形成
的核糖继而转变为糠醛，后者与地衣酚〔3，5-二羟基甲苯〕反响呈鲜绿
色，该反响需用三氯化铁或氯化铜作催化剂。〔3〕磷酸与钼酸铵试剂作
用产生黄色的磷钼酸铵沉淀[(NH4)3PO4·12MoO3↓]。
精选ppt
三、仪器、原料和试剂
l仪器：试管；
烧杯：100mL；
移液管：0.2mL(×1)、2.0mL(×2)、1mL(×2)；
量筒：10mL、50mL各一个；
滴管；
电磁炉；
离心机；
布氏漏斗。
l原料：干酵母粉
精选ppt
低速离心机
精选ppt
三、仪器、原料和试剂
l试剂：
l〔1〕0.2%氢氧化钠溶液；
l〔2〕10%硫酸；
l〔3〕0.1mol/L硝酸银溶液〔5%硝酸银溶液〕；
l〔4〕1mol/L浓氨水；
l〔5〕酸性乙醇溶液：30mL乙醇加0.3mLHCl；
l〔6〕地衣酚试剂：100mg地衣
文档评论（0）