医学课件 Alport综合征.ppt

预后判断 预后 母亲再生育 患儿婚育肾炎 多良好 无风险 无风险 （病理类型）薄膜 良好 常显 再发生Alport 多良好 50% 50%病例：4岁女童，无症状血尿2年完全无家族史皮肤基底膜?（IV）链染色正常电镜显示肾脏基底膜AS特异性病变 Alport：X连锁：其中18%“新突变” 常隐：占Alport15%Alport预后判断 预后 母亲再生育 患儿婚育X连锁 多良好 0/50% 50%常隐 差 25% 几乎0病例：4岁女童，无症状血尿2年完全无家族史皮肤基底膜?（IV）链染色正常电镜显示肾脏基底膜AS特异性病变 肾脏基底膜：?5（IV）仅包氏囊+ ?3、?4（IV）均–判断为常染色体隐性遗传型AS遗传型诊断该女童预后：不同于一般良性血尿 不同于XLAS女性该女童成人后的婚育问题 常隐：与正常人婚配——子女正常 （X连锁：再生育患儿机会50%）该女童家庭的再生育问题 常隐：再生育患儿机会25% 诊断临床症状综合征肾脏病理 Renalbiopsy,EM“goldcriteria” Skinbiopsy,?5(IV)staining遗传型基因Alport综合征基因诊断基因分析 确定携带者的诊断手段 确定遗传型的方法/证据 产前诊断的必需的前期工作 理解基因型与表型关系 COL4A5基因全长约250kb含有51个外显子转录产物大小约6.5kb已报道大量COL4A5基因突变：突变类型多种多样，未发现“热点突变”突变检测：基因组DNA分析 （PCR扩增外显子，51个片断）检测皮肤成纤维细胞mRNA序列进行基因诊断皮肤活检操作简单创伤小取材3x1mm2/3免疫荧光1/3皮肤成纤维细胞培养RT-PCR扩增仅5个片断（覆盖全部编码区）提取皮肤成纤维细胞RNA扩增后电泳：大片断缺失或插入直接测序：小或点突变以基因组DNA检测结果验证检测皮肤成纤维细胞mRNA序列进行基因诊断阐明非编码区（内含子）点突变与表型之间的关系 一些AS病例基因组DNA仅显示看似“多态性”的非编码区的点突变 但临床表型严重，难于理解 而mRNA水平直接确定了是完整或部分外显子缺失 证实严重临床表型的分子基础：基因组DNA是“不典型”剪接突变检测皮肤成纤维细胞mRNA序列进行基因诊断王芳，丁洁，等.北京大学学报（医学版），34(3):219,2002WangFang,DingJie,etal.PediatrNephrol,17(12):1013,2002王芳，丁洁，等.中华肾脏病杂志，19(5):281,2003王芳，丁洁，等.中国实用儿科杂志，18(6):346,2003王芳，丁洁，等.肾脏病与透析肾移植杂志，12(3):207,2003王芳，丁洁，等.北京大学学报（医学版），34(3):219,2002WangFang,DingJie,etal.PediatrNephrol,17(12):1013,2002率先进行了中国人AS的基因诊断发现了18个COL4A5基因新突变丁洁，等.肾脏病与透析肾移植杂志，20(6):501,2001丁洁，等.中华儿科杂志，39(7):390,2001DingJie,etal.ChinJPediatr,39Supplement21,2001丁洁，等.中华儿科杂志，37(8):473,1999检测皮肤成纤维细胞mRNA序列——进行基因诊断DetectionRateofVariants:90.3%3/28(10.7%)smallinsertionsordeletions12/28(42.8%)missense2/28(7.1%)nonsense4/28(14.4%)haplotypes7/28(25.0%)splicingmutations检测皮肤成纤维细胞mRNA序列进行基因诊断4/28(14.3%)typicalsplicesites3/28(10.7%)atypicalorcrypticsplicesites基因诊断思路和技术路线检测?5（IV）链mRNA快捷：PCR扩增5个片断：扩增51个片断耗资少：节省测序费用（为检测基因组DNA