呼吸道病原体IgM抗体检测PPT课件.pptx

呼吸道病原体IgM抗体检测

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主要内容：

一、常见呼吸道病原体概述

二、实验室检测

三、抗体荧光模型的结果判读

四、结果解释

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一、常见呼吸道病原体概述

1..呼吸道合胞病毒：主要侵犯上呼吸道的上皮组织，引起坏死性炎症，这可导致严重的支气管炎和肺炎，尤其在母乳喂养婴儿和低龄儿童中。传染性強，感染率高(大约90％的成人感染过)。抗呼吸道合胞病毒特异性lgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2－3个月。

2.腺病毒：可引起多种临床疾病，世界上6％的呼吸道感染是由腺病毒所引起的。主要通过气溶胶或物在人与人之间传播。在感染后的最初几天中，排泄物中的病毒含量最高。抗腺病毒特异IgM抗体最早出现在发病后1周左右，可持续存在2－3个月。

3.流感病毒：是最常见的感染性疾病之一，其典型的临床表现为咽炎、发热、重度不适和普通的急性呼吸道感染症状。在幼儿中还可出现胃痛和呕吐等胃肠道症状。流感主要在寒冷的季节流行，潜伏期为1－5天。流感病毒属于正粘病毒，分成A、B和C三型。由于流感病毒的基因变异能力很强，因而一次流感病毒感染不会产生终生免疫。对于高危人群(免疫力比较弱的人群或老人)，可在流感流行季节开始时用相关的病毒株进行免疫，但这也只对所使用的亚型具有保护作用。抗流感特异的IgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2－3个月。

4.副流感病毒：分布于世界各地，约35％的儿童和婴幼儿急性呼吸道感染是由副流感病毒所引起的。感染后可引起上呼吸道感染，经常伴有发热。副流感病毒感染可呈地方性流行，特别是在晚秋至第二年春天之间。主要通过气溶胶传播。抗副流感病毒特异的lgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2－3个月。

5.肺炎衣原体：主要通过气溶胶传播。约一半的肺炎衣原体感染无临床症状。感染最常见的临床症状为轨轻微的呼吸道感染。典型的症状为持续性干咳，也可出现咽痛、头疼和发热。初次感染2－3周后出现lgM抗体，并可持续存在2－6个月。在出现IgM抗体后的3－5周患者体内的IgG抗体水平明显升高，这意味着抗肺炎衣原体抗体检出时间要迟于许多其他感染。

6.肺炎支原体:可引起非典型性肺炎和常见的上呼吸道感染。主要通过气溶胶引起。

7.嗜肺军团菌：是一种胞内兼性短杆菌。可攻击肥大细胞并在其内繁殖。免疫力低下或心肺功能障碍患者特别易感。主要通过气溶胶传播，公共场所及医院中的冷热水系统、冷却塔和空调设备中的加湿器以及漩涡浴室均可成为传染源。

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二、实验室检测

1.检测方法：间接免疫荧光法。

2.实验原理：稀释的患者血清与包被有检测基质的载片温育。如果样本阳性，特异性IgM抗体与相应抗原结合。在第二步温育时，结合的抗体与荧光素(FlTC)标记的抗人免疫球蛋白抗体反应。然后在荧光显微镜下观察特异性的荧光模型。

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盖玻片

载片

标本稀释液

FITC标记的荧光二抗

封片介质（PBS甘油）

反应板

PBS吐温缓冲液

3.实验工具

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4.实验步骤

1、标本前处理：用免疫吸附（标本稀释液）等方法去除患者样本中的IgG类抗体。（这不仅可以防止样本中的IgM类类风湿因子与特异性结合的IgG反应引起假阳性结果，还可以防止特异性的IgG类抗体与IgM类抗体竞争性结合引起假IgM阴性结果。用样本稀释液，同时还可以去除类风湿因子）。推荐的样本起始稀释度为1:10（嗜肺和肺炎支原体1:100）。（16.6μl血清+150μl标本稀释液，2000rpm离心6min）

2、加样、温育：在反应板的反应区上加离心后的上清标本30微升(避免产生气泡)。将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里。室温温育30min。

3、冲洗：用配好的PBS吐温缓冲液流水冲洗载片，然后立即浸入装有PBS吐温缓冲液的洗杯中浸泡8min。

4、加样、温育：在反应板的反应区上加25μl的FlTC标记的荧光二抗)，将载片从PBS吐温缓冲液中取出（用吸水纸擦干边缘和背面水分），盖板室温温育30min。

5、冲洗：同第3步。

6、封片：滴加10μl封片基质至盖玻片反应区。将载片从PBS吐温缓冲液中取出擦干水分，朝下盖在盖玻片上并调整盖玻片位置，使其嵌入载片的凹槽中。

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（1）抗肺炎支原体抗体

荧光模型：结果阳性时，整个生物薄片上的肺炎支原体形成网络样荧光。对于阳性标本，肺炎支原体呈现均一的荧光。由于肺炎支原体顶部聚集了许多具有免疫原性的蛋白，因而顶部比其余部分的荧光更强。如果反应区上只出现单一的荧光，或者肺炎支原体只有较弱的荧光，结果应判为阴性。

（2）抗嗜肺军团菌抗体

荧光模型：生物薄片上菌体都应该出现清晰可见的荧光或者菌体边缘荧光更强。（短小的杆状菌体，发出均匀的荧光）

1.基质（菌体涂片）：

生物薄片上菌体都出现清晰可见的荧光才能判为阳性，尽量多观察几个视野，如果只是部分菌体出现荧光，不