离子交换层析.pptVIP

交换容量与pH关系2.交换容量测定离子交换剂的总交换容量通常以每毫克或每毫升交换剂含有可解离基团的摩尔数（mol?/?mg或mol?/?ml）来表示。通常可以由滴定法测定。阳离子交换剂首先用HCl处理，使其平衡离子为H+。再用水洗至中性，对于强酸型离子交换剂，用NaCl充分置换出H+，再用标准浓度的NaOH滴定生成的HCl，就可以计算出离子交换剂的交换容量。（五）稳定性离子交换剂都具有很好的理化稳定性。树脂类离子交换剂在较高的酸碱溶液中短时间处理后,性质无改变；亲水性离子交换剂在水、盐、碱、弱酸和有机溶剂等溶液中是稳定的。（六）比重离子交换剂经过溶胀后比重是恒定的。在装柱之前要充分溶胀,防止发生上浮现象。（七）流速影响柱压影响分辨率流速与柱压关系流速与分辨率关系第三节离子交换剂层析操作缓冲液的选择层析柱的选择洗脱速度↓↙加样洗脱洗脱液的监测收集及组分鉴定离子交换剂的清洗、再生和保存↓↓↓←离子交换剂的处理↓离子交换剂的选择++++++-------anionexchangebeadSampleapplicationandexchange-----------++++++----Elution----------------------------------++++++++++++--Regeneration-----------------------++++++1.离子交换剂的选择选择离子交换剂的原则首先是阴阳离子交换剂的选择其次是强弱离子交换剂的选择然后是不同离子型交换剂的选择最后是不同载体离子交换剂的选择阴阳离子交换剂的选择取决于被分离的物质在其稳定的pH下所带的电荷。如果带正电，则选择阳离子交换剂；如带负电，则选择阴离子交换剂；如果被分离的物质为两性离子，则根据其稳定的pH范围所带的电荷来选择。例如:某蛋白质的pI为5，若在pH5-8稳定，则选择阴离子交换剂；若在pH5以下稳定，则选择阳离子交换剂。一般来说,强性离子交换剂适用的pH范围广,常用来制备无离子水和一些在极端pH溶液中易解离且较稳定的物质。弱性离子交换剂pH范围窄,在pH中性的溶液中交换容量高,常用来分离生命大分子物质,确保不易失活。一般分离蛋白质等大分子物质常用弱酸型或弱碱型离子交换剂。强弱离子交换剂的选择离子交换剂处于电中性时,常带有反离子,如H+、Na+、NH4+、OH-、Cl-等。如何选择取决于离子交换剂与反离子的结合力。为了提高交换容量,应选择结合力较小的反离子。强阳性和强阴性离子交换剂应选择H型和OH型；弱阳性和弱阴性离子交换剂应选择Na型和Cl型。不同离子型交换剂的选择价格分辨率和稳定性特点纤维素离子交换剂较低较低适于初步分离和大量制备葡聚糖离子交换剂适中适中受外界影响较大，体积可能随离子强度和pH变化有较大改变，影响分辨率琼脂糖离子交换剂较贵较高不同载体离子交换剂的选择颗粒大小分辨率平衡时间流速应用小颗粒高长慢高分辨率的分析或分离大颗粒低短快分辨率要求不高、大规模制备性分离离子交换剂使用量的计算要根据离子交换剂全部交换容量和待分离物质的总量来计算。当溶液中含有各种杂质时,必须考虑交换容量留有充分余地,实际交换容量只能按理论交换容量的25%-50%来计算,甚至更低。举例:用717树脂分离200L含有2.2mol量的肌苷溶液,树脂的理论交换量为3.5mmol量/g,实际参与交换的树脂仅为理论交换量的7%,求需要717树脂的量。2.2×1000÷(3.5×7%)≈8900g2.离子交换剂的处理酸碱浸泡进一步去除杂质,并使离子交换剂带上需要的平衡离子,一般阳离子交换剂最后用碱NaOH处理,阴离子交换剂最后用酸HCl处理。每次酸碱处理后用蒸馏水洗涤至中性。膨化将干粉在水中充分溶胀,使离子交换剂颗粒的孔隙增大,具有交换活性的基团充分暴露出来。水悬浮去除杂质和细小颗粒抽气排除气泡3.缓冲液的选择保证各个待分离物质的稳定；使待分离样品与离子交换剂有较稳定的结合,尽量使杂质不与离子交换剂结合或结合不稳定；注意缓冲液中不能有与离子交换剂结合力强的离子,