2014年-9神经生物学实验报告-动物脑的立体定位技术.pdf

(完整word版)2014-9神经生物学实验报告-动物脑的立体定位技术

脑立体定位技术及切片制备

一、实验目的

通过本实验,了解动物脑立体定位及切片制备，并基本掌握动物脑立体定位技术及切片制

作。

二、实验设备及要求

实验分两部分:

Ⅰ大鼠脑立体定位（纹状体）

［器材和药品]

立体定位仪、10％水合氯醛溶液、1ml注射器、手术刀、粗剪刀、组织剪、止血钳、牙科钻

或骨钻、金属定位针、脱脂棉花、3%双氧水（HO）、生理盐水、75％酒精，墨水。

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［实验动物]

雄性SD大鼠（200—300g）

Ⅱ大鼠脑切片制备

［器材和药品]

器械：手术刀、组织剪、止血钳、咬骨钳、无齿钳、5ml注射器、6号针头、灌注瓶、恒冷

切片机

液体：4％多聚甲醛溶液

三、实验步骤

Ⅰ大鼠脑立体定位（纹状体）

1.立体定位仪的一般校验

2.动物麻醉：动物称重后，水合氯醛溶液按3.6ml/kg作腹腔注射麻醉.

3。头部固定：

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（1)插入耳棒：先将一侧耳棒轻轻插入外耳道，碰到骨性外耳道底后固定耳棒，继之同样插

入固定另一耳棒。检查大鼠头部固定是否稳定,松斜，两侧耳棒刻度是否对称,轻移耳棒使两侧

刻度一致头位完全居中,再次固定耳棒。三个标准检测是否固定成功:鼻对正中,头部不动，提尾

不掉。

（2）固定上颌：将大鼠的上门牙塞进上齿固定板的槽内,旋紧螺丝.从各方向推压动物头部,

均不应出现移动.通过定位针的测量调节前后囟在同一矢状线上，并使前后囟在同一水平线上.

4。开颅：剪去头部的毛，用75%酒精棉球作头部皮肤的消毒，沿矢状缝作切口，剥离筋膜

及肌肉,推开骨膜,并用3％双氧水洗净,用干棉球擦拭，暴露骨缝，止血。

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5。脑内核团定位：

（1）根据脑图谱,确定所要纹状体的立体位置，（纹状体：前囟前1mm，旁开2.5mm，深

3。5mm）。

(2）用定位针参照中线和前后囟在颅骨上标记进针的部位后，在指定位置钻孔，有突破（落

空）感后，停止钻孔。

6.定位标记及组织学鉴定：

（1)定位标记:根据定位坐标，插入微量注射针，注入染料。

（2）组织学鉴定:动物处死后，大鼠用左心室—主动脉插管（右心室开孔，便于灌洗液流

出），先后用生理盐水和4％多聚甲醛溶液灌流固定，取脑作冰冻连续切片，观察确定注射位置

是否准确.(第二部分实验详述）

Ⅱ大鼠脑切片制备

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1。组织固定(灌注固定）

（1）减开胸腔，暴露心脏

(2）将注射针头插入左心室，减开右心耳

(3)放松输液管夹，先用生理盐水冲去血液，直至右心耳流出液体清亮无色（一般原则灌洗

量不宜过多,灌洗时间不宜长。大鼠一般100ml)

（4）换以固定液继续灌流,先快后慢，固定液的量，大鼠一般为300-500ml左右

（5）开颅取脑，固定→切片

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2。切片

切片刀的安置:刀的刃面与组织切面之间应有一定的角度,称为余隙角a。余隙角一般在2～

5°

组织冷冻：冷冻适度,过冷可致切片横向断裂、冷冻不足，切片容易厚薄不匀

切片：动作连贯

四、实验结果

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了解了脑立体定位仪及切片制备基础知识，并在团队合作下完成了大鼠脑立体定位(纹状

体),以染料定位,以组学鉴定(切片）观察定