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核酸检测实验室标本制备非负压注意事项

（1）核酸检测实验室

新冠核酸检测实验室按功能区布置位置的不同，可分为集中布置

形式和分散布置形式。开展新冠病毒核酸检测的实验室应当设置以下

区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增和产物分析区。根据使

用仪器的功能，区域可适当合并。如采用标本加样、核酸提取及扩增

检测为一体的自动化分析仪，标本制备区、扩增和产物分析区可合并。

集中布置形式的实验室设置应遵循“各区独立，单向流动（注意风向，

压力梯度走向），因地制宜，方便工作”的原则。各区的功能如下：

①试剂储存和准备区

用于分装、储存试剂、制备扩增反应混合液，以及储存和准备实

验耗材。该区应配备冰箱或冰柜、离心机、试验台、涡旋振荡器、微

量加样器等。为防止污染，该区宜保持正压状态。

②标本制备区

标本转运桶的开启、标本灭活（必要时）、核酸提取及模板加入

至扩增反应管等。该区应配备冰箱或冰柜、生物安全柜、离心机、试

验台、微量加样器，可根据实际工作需要选配自动化核酸提取仪等。

标本转运桶的开启、分装应在生物安全柜内完成。为防止污染，该区

宜保持负压状态。为操作方便，标本的分装以及核酸提取也可以在独

立的生物安全二级（BSL-2）实验室进行，提取的核酸可以转运至该

区加至扩增反应液中。

③核酸扩增和产物分析区

进行核酸扩增反应和产物分析。该区应配备实时荧光定量PCR仪。

为防止扩增产物污染环境，该区宜保持负压状态，压力等于或低于标

本制备区。

（2）新冠病毒核酸的荧光定量RT-PCR检测

实验室应当制定标准操作程序（SOP），并严格按照SOP进行操

作。接到标本后，应当在生物安全柜内对标本进行清点核对，并依据

SOP进行试剂准备、标本前处理、核酸提取、核酸扩增、结果分析及

报告。实验室应当建立可疑标本复检的流程。

①试剂准备

应当选择国家药品监督管理部门批准的试剂，建议根据核酸提取

试剂及扩增体系的要求选择配套的标本采样管，不建议免提取核酸直

接进行核酸扩增反应。

②标本处理

使用含胍盐等灭活型采样液的标本无需进行灭活处理，可直接进

行核酸提取，而使用非灭活型采样液的标本，按照核酸提取试剂盒的

说明，取适量标本加至核酸提取裂解液中充分混匀作用一定的时间则

可以有效灭活病毒。选用热灭活时可采用95℃加热15分钟，不推荐

采用56℃孵育30分钟的处理方式灭活病毒，该条件不能保障充分灭

活病毒。污水水样标本处理可参考《污水中新型冠状病毒富集浓缩和

核酸检测方法标准》（WS/T799-2022）推荐的方法；污水拭子标本

处理可参考《农贸（集贸）市场新型冠状病毒环境监测技术规范》

（WS/T776-2021）推荐的方法。

③核酸提取

将灭活后的标本取出，在生物安全柜内打开标本采集管加样，或

按照核酸提取试剂盒的说明，将标本与裂解液作用足够时间后继续核

酸提取步骤，核酸提取完成后立即封盖。取适量核酸加至PCR扩增反

应体系中。

④核酸扩增

将扩增体系放入荧光定量PCR仪，按照试剂盒说明书设置扩增程

序，启动扩增程序。扩增完成后反应管不可开盖，直接放于垃圾袋中，

封好袋口，不可高压，按一般医疗废物转移出实验室处理。检测机构

所选用的新冠病毒核酸检测试剂应针对新冠病毒基因组中开放读码

框1ab（openreadingframe1ab，ORF1ab）和核衣壳蛋白

（nucleocapsidprotein，N）基因，人体标本检测原则上选择含内

源性内参的核酸检测试剂。

⑤阳性标本的确认

实验室确认阳性病例需满足以下两个条件中的一个：条件一：同

一份标本中新冠病毒2个靶标（ORF1ab、N）实时荧光RT-PCR检测结

果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果，则需要重新检测或

重新采样复核。条件二：两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标

阳性，或同种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结

果，可判定为阳性。环境与生物材料核酸检测阳性要排除疫苗接种物

残留污染的影响。核酸检测结果假阴性的可能原因包括：标本质量差；

标本采集时间过早或过晚；标本保存、运输和处理不当；其他原因如

病毒变异、PCR抑制等。

⑥质控

由上级疾控部门对下级疾控实验室进行核酸检测质控考核，中国

疾控中心每年至少开展一次