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发酵工程制药实验-链霉菌发酵--第1页

灰色链霉菌的活化

一、实验目的

二、实验原理

高氏一号斜面培养基是一种合成培养基，用于培养放线菌。

三、实验试剂与仪器

1.菌种：灰色链霉菌；

2.培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，氯化钠0.5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，

硫酸亚铁0.01g，琼脂20g，水1000毫升，PH7.2—7.4（配制时注意，可溶性淀粉要先用冷

水调匀后再加入到以上培养基中）；

3.器材：天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、18mL×180mL试管、

棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。

四、实验步骤

1.高氏一号培养基的制备

（1）按配方称量药品，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至1000mL。趁热分装于

18mL×180mL试管，斜面以8mL为宜。

（3）分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20min，灭菌

后趁热摆斜面。

2.斜面接种

接种是将纯种微生物，在无菌操作条件下，移植到已灭菌并适宜该菌生长繁殖所需要的

培养基中。为了获得微生物的纯种培养，要求接种过程中必须严格进行无菌操作。一般是在

无菌室内，超净工作台或实验台酒精灯火焰旁进行。

（1）左手拿试管菌种，右手拿接种环，先将金属环烧灼灭菌，再将接种环在空白培养

基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻。

（2）左手将试管菌种放下，拿起斜面培养基。在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉

塞并夹紧，迅速将接种环伸入空白斜面，在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上。划

线时由底部向上划一直线，一直划到斜面的顶部。注意勿将培养基划破，不要使菌体沾污管

壁。

（3）灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。接种完毕，接种环上的余菌必须灼烧灭菌后

才能放下。

（4）斜面置于28℃恒温箱中，培养5～6d观察结果。

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发酵工程制药实验-链霉菌发酵--第2页

灰色链霉菌的摇瓶种子制备

一、实验目的

二、实验原理

种子扩大培养简称种子扩培，是发酵工程的一个组成部分，其指将保存在砂土管、冷冻

干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大

培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。其目的首先是出于接种量的需要与菌种的驯化，

同时对于缩短发酵时间、保证生产水平也有帮助。

种子扩培的一般过程是：

斜面菌种→一级种子培养（摇瓶）→二级种子培养(种子罐)→发酵

对于种子制备过程，其大致可区分为实验室阶段和生产车间阶段，前期不用种子罐，所

用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因

此将这一培养过程称为实验室阶段的种子培养。而后期种子培养在种子罐里面进行，一般在

工程上归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。并非所有的种子扩

大培养都采用从摇瓶到种子罐的二级发酵模式，其实际发酵级数受到发酵规模、菌体生长特

性、接种量的影响。

摇瓶培养技术问世于本世纪30年代，由于其简便、实用，广泛用于微生物菌种筛选、

实验室大规模发酵试验、种子培养等。摇瓶培养设备主要有旋转式摇床和往复式摇床两种类

型，其中以旋转式最为常用。振荡培养中所使用的发酵容器通常为三角烧瓶，也有使用特殊

类型