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胚胎培养及ICSI(含IVM);目录;辅助生殖技术介绍;定义:一对健康夫妇在未采取避孕的前提下,经过一年的有规律的性生活,未能受孕,称为不孕。;体外授精--胚胎移植(IVF-ET)
InVitroFertilization-EmbryoTransfer
就是活生生地把卵子和精子都弄到体外,搞上了之后过个3、5天放回子宫里头去;;阶段一:卵巢刺激和监测;阶段二:卵母细胞收集;阶段三:受精;阶段四:胞浆内单精子注射;阶段五:胚胎移植;传统IVF流程;Day-1:培养液准备,传统IVF;Day0:取卵当天;卵母细胞的辨别:
把取卵液移到空培养皿中,辨别卵母细胞,立即用预先冲洗过的无菌吸管将卵母细胞从卵泡液和可能存在的血液污染中取出
预先冲洗无菌吸管应使用已添加蛋白的G-MOPS(捡出的卵子要洗个澡,精子才乐意同床,这会的卵子沐浴液就要用加蛋白的)
在已添加蛋白的G-MOPS中冲洗后,然后再在平衡过的已添加蛋白的G-IVF冲洗(至少重复两次),然后把卵母细胞移送到装有平衡过的并添加蛋白的G-IVF培养皿中,然后立即放进培养箱中(37℃,6%CO2)
;Day0:取卵当天;Day1:受精评估(加入精子后约15-20个小时);第二天:
评估胚胎卵裂,换液
备G-2TMPLUS
第三天:
评估胚胎卵裂
移植或冷冻保存。
继续培养
第四天:
转移胚胎至新鲜的G-2TMPLUS液滴中37℃,6%CO2过夜培养。
第五天早晨:
评估胚胎卵裂以确定移植或冷冻保存;ICSI;ICSI操作是把精子注射到卵母细胞中的过程。ICSI技术可以帮助因男方具有严重不育症而无法生育的夫妇实现成功妊娠;3.使用大口径的吸管,将3~5枚卵母细胞放进稀释的HYASE中。轻轻吸打,不要超过30s
4.将部分剥离的卵母细胞转移至第一冲洗液中,轻轻吹打每一个卵母细胞以除去放射冠,其余液滴中重复此项操作
5.观察卵母细胞中是否有极体(有极体-M2;无极体-M1);制备ICSI皿;ICSI操作;内容;未成熟卵母细胞体外成熟(IVM);操作步奏:
1.首先将抽取的血性卵泡液放在体视显微镜下观察拾卵(在60~100倍的体视显微镜下可以见到卵母细胞的发生泡GV,确定为GV期未成熟卵)
2.用MOPS冲洗后,放进体外??熟培养体系:G-IVF+10%HSA+0.075IU/ml的FSH(放进37℃,5%CO2培养)
3.未成熟卵母细胞体外培养24~48小时后,出现第一极体后进行ICSI授精
4.在20μLG-1培养液中培养,17~19小时后观察授精情况,继续培养24~48小时,授精后2~3d进行宫腔内胚胎移植
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