《甘蓝类蔬菜黑斑病菌分子检测技术规程》.pdf

ICS65.020.20

B15DB32

DB32/T

江苏省地方标准

甘蓝类蔬菜黑斑病菌分子检测技术规程

TechnicalregulationformoleculardetectionofAlternariabrassicicolaoncole

crops

（送审稿）

2024--发布2024--实施

江苏省市场监督管理局发布

前

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本标准的某些内容可能涉及专利。本标准发布机构不应承担识别这些专利的责任。

本标准由江苏省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：江苏省农业科学院、江苏省农业技术推广总站。

本标准主要起草人：余方伟、曾晓萍、李建斌、马金俊、王神云、张伟、于利。

1

甘蓝类蔬菜黑斑病菌分子检测技术规程

1范围

本文件规定了甘蓝类蔬菜黑斑病菌分子检测技术规程中重组酶聚合酶扩增方法的原理、试剂和材料

、仪器设备、试验步骤和结果判定。

本文件适用于甘蓝类蔬菜叶片、花茎、角果等样品中芸薹生链格孢（Alternariabrassicicola）的室

内检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，标注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不标注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适

用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3甘蓝类蔬菜黑斑病菌基本信息

中文学名：芸薹生链格孢

英文学名：Alternariabrassicicola

分类地位：半知菌亚门，丝孢目，暗色菌科，链格孢属。

其菌落形态和孢子特征见附录A。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

RPA重组酶聚合酶扩增（Recombinasepolymeraseamplification）

ATP三磷酸腺苷（Adenosinetriphosphate）

5原理

重组酶聚合酶扩增是一种快速分子检测技术，主要依靠重组酶、单链结合蛋白和链置换DNA聚合

酶在特定恒温条件下实现短时间内对靶标序列的高效扩增。RPA反应开始时，重组酶在ATP的参与下结

2

合引物，形成重组酶-引物复合体。这些复合体能够扫描与引物序列互补的目标双链DNA，然后侵入5

端位点，随后单链结合蛋白与被置换单链结合使其稳定。最后链置换DNA聚合酶结合在核酸蛋白复合

体的游离3端，进行链延伸。以上步骤循环进行，实现DNA数量的指数增长。

6试剂和材料

除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682的规定。

6.1.1RPA所用的引物序列见表1。

表1引物序列

引物序列（5′→3′）扩增片段大小

AbF1CAGACATGAACACGCCAACATGACTAGACC

213bp

AbR1GTGAGGCTTAGCGTAGAGTGTCAACGGTTC

6.1.2基因组DNA提取试剂盒。

6.1.3