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2022-9神经生物学实验报告范文-动物脑的立体定位技术--第1页
2022-9神经生物学实验报告范文-动物脑的立体定位技
术
脑立体定位技术及切片制备
一、实验目的
通过本实验，了解动物脑立体定位及切片制备，并基本掌握动物脑立
体定位技术及切片制作。二、实验设备及要求
实验分两部分：Ⅰ大鼠脑立体定位（纹状体）
[器材和药品]
立体定位仪、10％水合氯醛溶液、1ml注射器、手术刀、粗剪刀、组
织剪、止血钳、牙科钻或骨钻、金属定位针、脱脂棉花、3%双氧水
（H2O2）、生理盐水、75%酒精，墨水。
[实验动物]
雄性SD大鼠（200-300g）Ⅱ大鼠脑切片制备
[器材和药品]
器械：手术刀、组织剪、止血钳、咬骨钳、无齿钳、5ml注射器、6
号针头、灌注瓶、恒冷切片机
液体：4％多聚甲醛溶液
三、实验步骤
Ⅰ大鼠脑立体定位（纹状体）
1.立体定位仪的一般校验
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2.动物麻醉：动物称重后，水合氯醛溶液按3.6ml/kg作腹腔注射麻
醉。3.头部固定：
（1）插入耳棒：先将一侧耳棒轻轻插入外耳道，碰到骨性外耳道底
后固定耳棒，继之同样插入固定另一耳棒。检查大鼠头部固定是否稳定，
松斜，两侧耳棒刻度是否对称，轻移耳棒使两侧刻度一致头位完全居中，
再次固定耳棒。三个
标准检测是否固定成功：鼻对正中，头部不动，提尾不掉。
（2）固定上颌：将大鼠的上门牙塞进上齿固定板的槽内，旋紧螺丝。
从各方向推压动物头部，均不应出现移动。通过定位针的测量调节前后囟
在同一矢状线上，并使前后囟在同一水平线上。
4.开颅：剪去头部的毛，用75%酒精棉球作头部皮肤的消毒，沿矢状
缝作切口，剥离筋膜及肌肉，推开骨膜，并用3%双氧水洗净，用干棉球
擦拭，暴露
骨缝，止血。
5.脑内核团定位:
（1）根据脑图谱，确定所要纹状体的立体位置，（纹状体：前囟前
1mm,旁开2.5mm,深3.5mm）。
（2）用定位针参照中线和前后囟在颅骨上标记进针的部位后，在指
定位置钻孔，有突破（落空）感后，停止钻孔。
6.定位标记及组织学鉴定：
（1）定位标记：根据定位坐标，插入微量注射针，注入染料。
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（2）组织学鉴定：动物处死后，大鼠用左心室—主动脉插管（右心
室开孔，便于灌洗液流出），先后用生理盐水和4%多聚甲醛溶液灌流固
定,取脑作冰冻连续切片，观察确定注射位置是否准确。（第二部分实验
详述）Ⅱ大鼠脑切片制备
1.组织固定（灌注固定）（1）减开胸腔，暴露心脏
（2）将注射针头插入左心室，减开右心耳
（3）放松输液管夹，先用生理盐水冲去血液，直至右心耳流出液体
清亮无色（一般原则灌洗量不宜过多，灌洗时间不宜长。大鼠一般100ml）
（4）换以固定液继续灌流，先快后慢，固定液的量，大鼠一般为
300-500ml左右
（5）开颅取脑，固定→切片
2.切片
切片刀的安置：刀的刃面与组织切面之间应有一定的角度，称为余隙角a。
余隙角一般在2~5
组织冷冻：冷冻适度，过冷可致切片横向断裂、冷冻不足，切片容易
厚薄不匀
切片：动作连贯四、实验结果
了解了脑立体定位仪及
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