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低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白--第1页
低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白
一、实验目的
利用低温乙醇法从人血清中分离出免疫球蛋白（Ig），并获得
副产物血清白蛋白。
二、实验原理
（1）低温乙醇法Cohn6法：美国哈佛大学Ｅ·ＪCOHN·教授研
究组，在短短两年建立了低温乙醇分段提取法。
方法原理：往蛋白水溶液中加入中溶性有机溶剂，如乙醇、丙
酮等，主要是降低水分子的活度，降低溶液的介电常数，从蛋
白分子周围排斥水分子，使蛋白分子之间通过极性基团的相互
作用，在范德华力作用下，发生凝聚。不过由于有机溶剂存在，
降低了蛋白分子表面憎水基团的作用，因而引起蛋白分子聚集
的主要极性基团的相互电荷之间的引力。（文献20）
分离过程中，二法通过五个因素的变动(五变系统)，使很多血
浆蛋白质得以分离。这五个因素及其各自的作用是；①乙醇：
使蛋白质分子“脱水”；⑦pH值；蛋白质在等电点时易于沉淀；
②电解质浓度：在低离子浓度下，对蛋白质溶解度有较大影响；
④蛋白质浓度：浓度越低，其沉淀作用越小；⑥温度：在低温
下，可避免乙醇对蛋白质的变性作用。同时，蛋白质溶解为吸
热反应，溶解度随温度上升而增高。
经实验得知，利用低温乙醇法能将血清蛋白分成六个组分
（Ⅰ~Ⅵ），其中免疫球蛋白IgG主要存在于Ⅱ+Ⅲ中，白蛋白
Alb主要存在于Ⅴ中。
(2)Cohn氏9法；该法对Cohn氏6法的组分Ⅱ+Ⅲ作进一步分离和
提纯，可获得组分Ⅱ—l，2，3(Y—G)，组分Ⅲ一1(同种凝集素)，
组分Ⅲ—2(凝血酶原)，组分Ⅲ—3(血浆酶原)等产品。其工艺流
程见图:
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低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白--第2页
乙醇法生产中所用的乙醇是通过予冷、慢速搅拌滴入的。其体
积可按下式计算：
式中V＝所需乙醇体积；V0＝原来溶液体积；C1＝原来溶液乙
醇浓度；C2＝所需达到乙醇浓度；C3＝加入乙醇的浓度。
三、材料和试剂
3.1血清：100mL
3.2相关试剂：95%乙醇，pH4.0醋酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲
液Ⅰ，磷酸盐缓冲液Ⅱ，3mol/LNaCl溶液，1mol/LNaHCO3，
生理氯化钠溶液，麦芽糖，
3.3实验仪器：
四、方法与步骤
基本思路：
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低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白--第3页
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血清的初处理——利用Cohn6法得到组分Ⅱ+Ⅲ——利用Cohn9
法得到IgG——IgG沉淀的保存（浓缩蛋白液或冻干品）——Ig
物理性状及生化检定（蛋白含量、纯度、免疫活性、稳定性）
4.1血清的初处理（文献[4]，名词.txt中关于血清的部分）
（1）将血清从冷冻箱（-5C至-20℃）取出后，先置于2-8℃冰
箱使之溶解
（2）在室温下使之全溶。以上操作注意随时将之摇晃均匀，使
温度及成分均一，减少沉淀的发生。
（3）热灭活（目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，
通常因为高温处理影响了血清的质量，故省略）。
4.2低温乙醇法提取Ig及副产物Alb（生物制品基础摘录4~5，
文献4、17）
（1）量取血清体积100mL，搅拌降温至0~4℃，将血清调pH7.2，
调节NaCl浓度至0.14mol/L，加乙醇至8%，加入乙
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