饲料蛋白水解氨基酸含量的测定-实验方案.pdf

饲料中蛋白质水解氨基酸含量的测定

一、实验目的

1.掌握饲料中蛋白水解氨基酸的测定方法及原理。

2.掌握饲料中蛋白质水解氨基酸的样品制备方法。

3.了解全自动氨基酸测定仪的分析原理及工作流程。

4.了解氨基酸测定结果的影响因素。

二、实验内容

采用全自动氨基酸分析仪应用茚三酮显色法测定饲料样品（豆粕、玉米、配合饲料）

中蛋白质水解后氨基酸的含量。

蛋白质水解法适于含动植物蛋白的单一饲料、配合饲料、浓缩饲料和预混料中氨基酸

的测定，包含常规酸水解法、氧化酸水解法和碱水解法。氧化酸水解法主要用于测定含硫

氨基酸，碱水解法只适于测定色氨酸。普通酸水解法会破坏色氨酸和部分破坏含硫氨基酸，

适于测定除色氨酸、含硫氨基酸(胱氨酸和蛋氨酸等)以外的蛋白水解氨基酸，使用最广，

本实验将采用该样品预处理方法。

三、实验原理

蛋白质由氨基酸聚合而成，其中氨基酸的测定需先水解成单一氨基酸。由于多数氨基

酸不含特征发色基团（除Tyr、Try、Phe含苯环有紫外吸收），氨基酸的分析依赖于衍生

化反应。混合氨基酸经过离子交换树脂分离，依次发生显色反应后，由分光光度计测定吸

光度，采用外标法定量。

1.氨基酸分离原理：氨基酸的洗脱顺序主要取决于各氨基酸的等电点（酸性氨基酸pI

2.8-3.2，中性氨基酸pI5.0-6.3，碱性氨基酸pI7.6-10.8）。所有氨基酸在pH2.2

以下都带正电荷，被带负电的阳离子树脂吸附，但吸附程度不同：碱性氨基酸结合力最强，

其次为芳香氨基酸和中性氨基酸，酸性氨基酸结合力最弱。当洗脱液的pH值逐渐升高时，

原来带正电荷的酸性氨基酸先失去正电荷从树脂洗脱下来，此时中性氨基酸和碱性氨基酸

仍与树脂结合的紧，需要更高的PH值洗脱液才能将它们洗脱下来。另外，洗脱顺序还与

分子极性和分子大小有关，具有短侧链的氨基酸比长侧链的氨基酸先洗脱下来，支链增加

洗脱越容易，侧链羟基化氨基酸优先洗脱下来。综合如下表1：

表1.PH型色谱柱分离17种氨基酸出峰顺序

名称缩写

支链等电点R基分子量

1

天冬氨酸Asp

酸性2.85-CH₂-COOH133.1

苏氨酸Thr

亲水性5.6-CH(CH₃)-OH119.12

丝氨酸Ser

亲水性5.68-CH₂-OH105.09

谷氨酸Glu

酸性3.15-(CH₂₂147.13

)-COOH

脯氨酸Pro

疏水性6.3-C₃₆115.13

H

甘氨酸Gly

亲水性6.06-H75.07

丙氨酸Ala

疏水性6.11-CH₃89.09

半胱氨酸Cys

亲水性5.05-CH₂-SH121.16

缬氨酸Val

疏水性6-CH-(CH₃₂117.15

)

甲硫氨酸Met

疏水性5.74-(CH₂)-S-CH₃