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ISSR标记在中国野生葡萄分类中的应用
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论文导读:：利用ISSR标记对包含16个中国葡萄野生种及其近缘植物的81份材料进行分类研究，从100条引物中筛选出13条带型清晰、重复性高、多态性好的引物用于ISSR扩增，共扩增出分子量在300～2000bp之间的185条带，其中多态性条带175条，多态百分率为94.6%。根据ISSR扩增结果，利用NTSYSpc2.10e软件进行相似性系数分析，81份葡萄种质的遗传相似性系数为0.57～0.99。通过UPGMA进行聚类分析，在遗传相似系数为0.83处，79份真葡萄亚属材料聚成22类，聚类结果与传统的分类结果基本一致。同时，根据ISSR聚类结果，将供试材料‘毛葡萄1099’确定为桑叶葡萄，对‘燕山葡萄0947’是否为燕山葡萄提出质疑，并检测出供试的变叶葡萄材料不是一个纯种，而是存在种间的过渡类型。
论文关键词：
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我国是葡萄属植物的重要原产地之一，也是世界葡萄属植物种质资源最丰富的国家，原产的葡萄属植物有38个种、1个亚种和7个变种[1]，此外，尚不确定或有争议的疑问种或变种14个[2]。不同研究者从形态学[3-7]、孢粉学[8-10]、解剖学[11]和生物化学[12-15]等方面对中国野生葡萄的分类进行了大量的研究，利用RAPD技术在葡萄属植物和葡萄品种的分类及亲缘关系上也有一些探索[16,17]。由于葡萄属内种间性状的过渡类型和种内多型性现象比较常见，加之分类学者对种或变种等的分类标准意见不一，使得我国原生的葡萄属植物种类的具体数目尚无公认的定论[2,18,19]。因此，可以利用分子生物学方法对其进行更为深入的研究。ISSR（InterSimpleSequenceRepeat）标记是基于微卫星序列发展起来的一项技术[20]，与RAPD、RFLP、AFLP、SSR等分子标记方法相比，该方法具有快捷、稳定、成本低、DNA用量少和安全性较高等优势[21]，已在果树遗传学研究各个方面得到广泛应用，如品种鉴定、亲缘关系分析、遗传多样性分析以及遗传图谱的构建等[22-26]。
本研究应用ISSR分子标记技术，对包括东亚种群（16个中国野生葡萄种）、欧亚种、欧山杂种、美洲种群（沙地葡萄和河岸葡萄）和砧木品种华佳8号（华东葡萄×欧亚种）及其近缘植物在内的81份葡萄种质进行研究，旨在探索利用ISSR标记在葡萄属植物分类上的可行性。
1材料和方法
1.1材料
材料来源于中国农业科学院郑州果树研究所国家果树种质葡萄资源圃，其名称和编号见表1。
表1用于ISSR分析的葡萄材料
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编号No.
名称
Names
种名
Speices
编号No.
名称
Names
种名
Speices
1
广西毛葡萄
Guangximaoputao
毛葡萄
V.heyneanaRoem.Schult
42
华佳8号
HuajiaNo.8
华东葡萄×欧亚种
V.pseudoreticulat×V.vinifera
2
毛葡萄1099
Maoputao1099
43
红岩华东01
Hongyanhuadong01
华东葡萄
V.pseudoreticulatW.T.Wang
3
都安毛葡萄
Duanmaoputao
44
双溪华东02
Shuangxihuadong02
4
高山二号
GaoshanNo.2
刺葡萄
V.davidii
(Roman．duCaill．)Fo?x.
45
桐木华东01
Tongmuhuadong01
5
高山一号
GaoshanNo.1
46
广西华东
Guanxihuadong
6
塘尾实生
Tangweishisheng
47
灵宝变叶01
Lingbaobianye01
变叶葡萄
V.piasezkiiMaxim.
7
洪江刺09
Hongjiangci09
48
灵宝变叶02
Lingbaobianye02
8
刺葡萄941
Hongjiangci941
49
四道岭变叶
Sidaolingbianye
9
刺葡萄940
Ciputao940
50
麦积山变叶
Maijishanbianye
10
湖南刺葡萄
Hunanciputao
51
亚武山变叶08
Yawushanbianye08
11
桑叶葡萄946
Sangyeputao946
桑叶葡萄
subsp.ficifolia(Bge.)C.L.Li
52
亚武山变叶07
Yawushanbianye07
12
桑叶葡萄943
Sangyeputao943
53
卢氏变叶08
Lushibianye08
13
九里沟桑叶
Jiuligousangye
54
变叶葡萄0957
Bianyeputao0957
14
冯举沟桑02
Fengjugousa
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