酶的功能及作用.ppt

共价修饰酶通常有活性与非活性两种形式，两种形式之间转换的正、逆反应是由不同的酶催化产生。如骨骼肌中的糖原磷酸化酶有高活性的磷酸化形式与低活性的脱磷酸化形式两种，从脱磷酸化形式转化成磷酸化形式是由磷酸化酶b激酶催化，反之，则是有由磷酸化酶磷酸酶催化。目前已发现有几百种酶被翻译后都需要进行共价修饰，其中一部分处于分支途径，对其代谢流量起调节作用的关键酶，属于这种酶促共价修饰系统。由于这种调节的生理意义广泛，反应灵敏，节约能源，机制多样，在体内显得十分灵活，加之它们常受激素甚至神经的指令，导致级联放大反应，所以日益引人注目。第156页,共173页，星期六，2024年，5月级联效应第157页,共173页，星期六，2024年，5月第五节酶的活力测定、酶的制备及应用一、酶活力的测定1.概念指酶催化一定化学反应的能力，通常用最适条件下酶所催化的化学反应的速度来衡量。酶促反应的速度越快，表示酶的活力越高。反之，则低。第158页,共173页，星期六，2024年，5月2.酶活力的表示法酶活力的大小用酶活力单位来表示。常用的酶活力单位有三种：（1）.国际单位：在标准条件（25℃、最适pH、最适底物浓度）下，酶在1分钟内转化1umol底物所需的酶量叫做1个酶的活力单位（IU）。这种单位是由国际酶学委员会规定的。第159页,共173页，星期六，2024年，5月(2).Kat单位：在最适条件下，酶在1秒钟内转化1mol底物所需的酶量叫做1个酶的活力单位（1个Kat）。1Kat=60×106IU

这是1972年由国际酶学委员会规定的一种新单位。第160页,共173页，星期六，2024年，5月（3）自定义的活力单位：把酶习惯上或测定时使用的反应速度的单位定义为酶的活力单位。有的甚至直接用测得的物理量，如以单位时间内消光值的变化(DA/t)表示酶活力单位。这种方法简单方便，省去了许多计算，但只能进行酶活力的相对比较。第161页,共173页，星期六，2024年，5月3.比活力指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数。即比活力是酶制剂纯度的一个常用指标。比活力越大，表示酶越纯。第162页,共173页，星期六，2024年，5月4、酶活力的测定方法

分光光度法、荧光法、同位素法、电化学法等要求：快速、简便、准确一般包括两个阶段：首先在一定条件下，酶与底物反应一段时间；再测定反应液中底物或产物的消耗量或生成量。一般经如下几个步骤：选择适宜的一定浓度的底物确定酶促反应的条件将一定量的酶液和底物溶液混合反应到一定时间（因要测定酶促反应初速度），取出反应液终止反应测定产物的生成量。第163页,共173页，星期六，2024年，5月测定酶活力时应注意几点

（1）应测反应初速度（initialvelocityorinitialspeed）（2）酶的反应速度一般用单位时间内产物的增加量来表示。（3）测酶活力时应使反应温度、pH、离子强度和底物浓度等因素保持恒定。（4）测定酶反应速度时，应使[S][E]。第164页,共173页，星期六，2024年，5月二、酶的制备1、工业上大多采用微生物发酵法来获得大量的酶制剂.2、分离纯化酶的方法：盐析法、有机溶剂沉淀法、吸附法。第165页,共173页，星期六，2024年，5月三、酶的分离纯化

1．选材：酶含量高的材料2．破碎细胞：机械破壁，化学破壁酶破壁温度破壁等3．抽提：缓冲液4．去核酸、去多糖5．纯化：提取蛋白质方法6．保存：低温干燥保存酶的特殊性，在提纯过程中要注意:1．全部操作在低温0～4℃。2．在分离提纯过程中，不能剧烈搅拌。3．在提纯溶剂中加一些保护剂，如少量EDTA、少量β-巯基乙醇。4．在分离提纯过程中要不断测定酶活力和蛋白质浓度，从而求得比活力，还要计算总活力。第166页,共173页，星期六，2024年，5月四、酶的应用

1、固定化酶：将一种可溶性酶与不溶性的有机或无机基质结合，或者将其包埋到特殊的具有选择透过膜内来提高酶的稳定性，以便重复和持续利用。2、固定化酶的性质：（1）酶的稳定性提高；（2）最适PH值改变；（3）酶的活性和催化底物有所变化；（4）最适温度有所提高；3、固定化酶的作用：（1）酶固定化后，不易破损可以反复多次使用；（2）酶不易游离到产品中，产品易于纯化；（3）便于产业化、连续化、自动化。第167页,共173页，星期六，2024年，5月固定化酶的制