DNA重组技术的工具公开课省公开课一等奖全国示范课微课金奖课件.pptVIP

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基因工程概念基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。通俗讲就是按照人们意愿,把一个基因提取出来,加以修饰改造,经过体外DNA重组和转基因等技术,转入另一生物细胞内,定向改造生物遗传性状。陆丰龙山中学2/26

抗虫棉培育苏云金杆菌毒蛋白杀死害虫毒蛋白基因棉花植株细胞内陆丰龙山中学3/26

陆丰龙山中学1.1DNA重组技术基本工具基本工具:（1）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”（2）DNA连接酶——“分子缝合针”（3）基因进入受体细胞载体——“分子运输车”4/26

陆丰龙山中学特点:一个限制酶只能识别DNA特定核苷酸序列，并在特定位点切割DNA。“分子手术刀”——限制性核酸内切酶5/26

陆丰龙山中学限制酶6/26

陆丰龙山中学限制酶到底切是什么呢？磷酸二酯键7/26

陆丰龙山中学两种不一样生物DNA，用同种限制酶切割，那么会出现什么现象呢？出现相同黏性末端GAATTC

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GEcoRI切割位点黏性末端黏性末端8/26

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G不一样生物DNA片段会不会结合呢？这两个缺口怎样“缝合”呢？9/26

陆丰龙山中学2.DNA连接酶－“分子缝合针”DNA连接酶连接什么呢？？将两个DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开两个核苷酸之间磷酸二酯键。10/26

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陆丰龙山中学磷酸二酯键DNA连接酶12/26

AGTACAAATGCGACGGTTATTADNA聚合酶陆丰龙山中学13/26

AGTACAAATGCGCGGTTATTATDNA聚合酶陆丰龙山中学14/26

AGTACAAATGGCGGTTATTATCDNA聚合酶陆丰龙山中学15/26

AGTACAAATGGCGGTTATTATCDNADNA聚合酶含有连接单链DNA本事陆丰龙山中学16/26

DNA聚合酶DNA连接酶区分1区分2相同点DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为何?1)只能将单个核苷酸连接到已经有核酸片段上,形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2)以一条DNA链为模板,将单个核苷酸经过磷酸二酯键连接成一条互补DNA链2)将DNA双链上两个缺口同时连接起来,不需要模板陆丰龙山中学17/26

陆丰龙山中学DNA连接酶种类E.coliDNA连接酶:黏性末端T4DNA连接酶:黏性末端和平末端18/26

基因进入受体细胞载体－“分子运输车”基因工程载体种类:质粒λ噬菌体衍生物动植物病毒作为基因工程载体需要怎样条件呢？陆丰龙山中学将外源基因送入受体细胞。载体作用:19/26

作为载体必要条件:①有切割位点——供外源DNA片段(基因)插入。②能自我复制③有遗传标识基因——供重组DNA判定和选择。④载体DNA必需是安全——不会对受体细胞有害,或不能进入到除受体细胞外其它生物细胞中去。⑤载体DNA分子大小应适合——方便提取和在体外进行操作,太大就不便操作。陆丰龙山中学20/26

惯用载体:质粒复制起始一段序列有切割位点有标识基因存在,可用含氨苄青霉素培养基判别质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物细胞中。是一个裸露、结构简单、独立于细菌拟核DNA或细胞核之外自我复制很小双链环状DNA分子陆丰龙山中学21/26

小结基因工程工具限制酶主要存在于原核生物中含有专一性(识别序列)切开DNA分子磷酸二酯键DNA连接酶连接磷酸二酯键种类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶运载工具具备条件结构简单,大小适中能在宿主细胞中自我复制并稳定存在具一个或多个限制酶切位点具标识基因质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒陆丰龙山中学22/26

以下是两种限制酶切割后形成DNA片段，试分析:①GC…②AATTC…③…GC④…CTTAACG…G……CG…G(1)其中①和是由一个限制酶切割形成末端,二者要重组成一个DNA分子,所用DNA连接酶通常是。（2）和