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分子生物学检测(1)HIVRNA检测——RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)PCR:高温变性(94℃)→低温退火(55℃)→适温延伸(72℃);经25~30个循环,成倍数扩增荧光定量PCR:比常规PCR多一个寡聚核苷酸探针(带一个荧光发光分子和一个荧光淬灭分子)应用:PCR查PBMCs前病毒DNA;RT-PCR查血浆中的病毒RNA分子生物学检测(2)淋巴细胞HIVRNA检测——Northern印迹杂交(Northernblot)原理:RNA片段经电泳分离,从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜,再用探针杂交分子生物学检测(3)HIV变异株检测——Sanger测序法原理:核酸扩增时,核苷酸在某一固定点开始,随机在某一特定的碱基处终止,产生A、T、C.G四组不同长度的一系列核苷酸,通过在尿素变性的PAGE胶上电泳,获得DNA序列诊断诊断依据流行病学史:有静脉注射毒品史;多个性伴和不洁性生活史;输入未经HIV抗体检测的血液和血制品史;HIV抗体阳性所生的子女;其它(如职业暴露或医源性感染史)。临床表现:高危对象出现发热、头痛、咽痛、恶心、厌食、全身不适、关节肌肉疼痛、红斑样皮疹、血小板减少等传染性单核细胞增多症样表现;颈、腋及枕部淋巴结肿大;肝脾肿大,可考虑急性HIV感染。感染进入无症状期多无任何表现,也可有淋巴结肿大,疲劳,乏力等。实验室检查:①HIV抗体阳性,并经确证试验确认;②血浆HIVRNA阳性;③CD4+T淋巴细胞数明显减少。预后影响预后的因素感染的HIV型别及亚型:HIV-1较HIV-2临床进展快并发的机会性感染:同时合并卡波济肉瘤及肺孢菌肺炎者病死率最高;合并丙型肝炎者预后差抗逆转录病毒治疗:—治疗改变了艾滋病进程—未治疗者的四种结局:典型、快速进展型、长期无进展型、长期存活型HIV感染的四种转归典型(70-80%):5-10年进展为艾滋病快速进展型(10-15%):2-3年长期存活型(极少):进展到艾滋病期后能稳定较长一段时间长期无进展型(5%):HIV感染超过10年,CD4+细胞500/mm3,病毒载量103拷贝/ml治疗治疗原则健康的生活方式和营养作基础合理应用抗病毒药物正确使用抗机会性感染和肿瘤药物辅以适当的支持、对症治疗最终目标:提高生存质量和生存期流行情况自1981年美国首次报道,已有200个以上国家和地区发现HIV-1感染者WHO估计,全球HIV感染者至少8000万人,已有2480万人死亡。新增HIV感染者500万/年、1.6万/天、11例/分钟非洲、美洲、欧洲多发,亚洲HIV感染者快速增加(已近1000万)1985年传入我国,流行已进入快速增长期(估计近100万)
我国流行情况截至2006年12月31日,全国累计报告HIV感染者191565例,其中艾滋病病人47713,累计死亡13632人按联合国艾滋病规划署和WHO推荐的方法估算,中国现有HIV感染者和病人约84万我国艾滋病流行特点疫情地区差异大疫情继续呈上升趋势传播途径仍以吸毒为主,但三种途径并存发病和死亡持续增加呈高危人群向普通人群扩散态势女性感染者比例上升发病机制和病理解剖HIV动态感染过程吸附↓脱衣壳↓逆转录↓环化↓前病毒,整合↓转录,翻译↓核心颗粒装配↓出芽HIV生活周期HIV的吸附与脱衣壳过程HIV表面的gp120与CD4分子结合→病毒外膜和CD4受体构象改变→允许gp120和辅助受体即嗜淋巴细胞受体(CXCR4)及趋化因子受体(CCR5)结合→第二个连接使病毒和细胞膜紧密结合,允许gp41和和细胞膜融合区结合→HIV与细胞膜融合→HIV核心及RNA进入细胞浆HIV毒株——R5株(低/慢型)、X4株(高/快型)根据辅助受体的不同(CCR5.CXCR4),HIV分为R5和X4毒株,新感染病毒以R5株为主,复制速度慢,病毒量少,称低/慢型,感染一段时间后,病毒转化为X4株为主,复制速度快,病毒量多,称高/快型。高/快型病毒为合胞体诱导株(SI,病毒培养产生细胞融合),低/慢型病毒为非合胞体诱导株(NSI)。HIV侵犯各种表达CD4分子的细胞CD4+T淋巴细胞CD8+T淋巴细胞B淋巴细胞郎罕细胞单核-吞噬细胞树突状细胞神经胶质神经元细胞HIV免疫病理靶细胞(CD4+T细胞)的免疫损伤机制至少有3种:—细胞毒效应:受细胞毒性T细胞(CTL)攻击—细胞凋亡:感染的靶细胞表面表达CD95L(fa
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