吴怡慧项目二超氧化物歧化酶(SOD)的生产课件.pptVIP

预习方案汇报PPT项目二超氧化物歧化酶（SOD）的生产班级：生物制药1411姓名：吴怡慧

目1酶与SDO酶的基本知识酶的生产工艺与准备SOD酶的检验与准备注意事项录234

diyizhangjie第一章节1、酶的基本知识2、超氧化物歧化酶（SOD）基本知识

酶的基本知识酶是由生物活细胞产生的具有特殊催化功能的一类生物活性物质，p其化学本质是蛋白质，故也称酶蛋白。用于预防，治疗和诊断疾病的一类酶制剂，称为药用酶。早期主p要用于治疗消化道疾病、烧伤及感染引起的炎症等，现已广泛应用于多种疾病的治疗。药用酶制备通常有三种方法：直接提取法；微生物发酵法；动植p物细胞培养法药用酶常用提取纯化方法有：水溶液法；有机溶剂法；表面活性p剂法（应用较少）

p概念：超氧化物歧化酶（SOD）基本知识超氧物歧化酶（Superoxidv主要来源：大蒜蒜瓣（含有丰富的SOD酶）e

dierzhangjie第二章节1、SOD酶的提取原理2、实训准备（材料与仪器)3、酶的生产工艺流程图

SOD酶的提取原理?超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子(O2-)进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲溶液提取出来。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。?有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数，使蛋白质分子之间的静电引力增大。同时，有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强，它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水，破坏其表面的水化膜，导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集，从而沉淀析出。

实训准备（材料与仪器）材料：大蒜蒜瓣氯仿-乙醇混合液仪器：一个石英砂研钵离心管移液管冷丙酮玻璃棒磷酸缓冲溶液（PH7.8、塞离心管离心机0.05mol/L)冷冻离心机

SOD酶的生产工艺流程图冷冻干燥将沉淀置于5ml磷酸缓冲溶液中（PH7.8、称取5g大蒜蒜瓣得到SOD酶沉淀分离捣碎0.05mol/ml）持续搅拌15min以6000r/min离心15min以6000r/min离心15min加入磷酸缓冲溶液15ml(PH7.8弃沉淀取上清液0.05mol/L)加入等体积冷丙酮得到粗酶液提取再研磨20min直到充分溶解纯化除杂蛋白弃沉淀取上清用凝胶SephacrylS-200进行纯化置于冷冻离心机以6000r/min离心15min以6000r/min离心15min搅拌15min进行超滤浓缩得到SOD酶于上清液中加入1/4倍体积氯仿-乙醇混合液弃沉淀取上清

disanzhangjie第三章节1、SOD酶检验的原理2、实训准备（材料、3、SOD酶检验步骤仪器）

SOD酶检验原理连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-,生成带色的中间产物（反应液由黄棕色变为绿色，再变为黄色，这是由于生成的中间物不断氧化的结果）。在自氧化过程的初始阶段，黄色中间产物的积累在滞后30-45s后就与时间呈现性关系。中间产物在420nm处有强烈的光吸收，线性时间一般维持4min的范围内。在有SOD存在时能催化生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，通过计算就可以求出SOD的活力。邻苯三酚自养化法测定酶活力，计算公式：0.070-供试品溶液速率供试品溶液稀释倍数单位体积活力（u/ml）=xx反应液总体积0.07050%x100%供试品溶液体积总活力（U）=单位体积活力x原液总体积v酶活力单位意义：在25℃恒温条件下，每毫升反应液中，每分钟制邻苯酚自氧化率达50%的酶量定义为1个酶活力单位。

SOD酶检验准备试剂：仪器：（1）PH8.3050mol/LKPHO-2（1）PH计4KHPO缓冲溶液：25℃下2496.5ml1mol/LKHPO与（2）紫外分光光度计23.5ml1mol/LKHPO混合后用水4（3）恒温水浴槽（4）10ml试管24稀释至2000ml（2）0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连苯三酚用0.01mol/L（5）1cm比色皿盐酸溶液溶解并定容至500ml（3）10mol/L盐酸溶液

SOD酶检验步骤一、连苯三酚自养化速率的测定（1）准备好两只试管，同时加入PH值为8.30的50mol/LKHPO-2KHPO缓冲溶液4.50ml，在25+-0.5℃的恒温水浴中保温10min；424（2）其中一只试管加入等体积事先预热好的25℃连苯三酚溶液，另支试管作为空白管，加入等体积10mol/LHCl，迅速摇匀后倒入1cm比色皿中；（3）以空白管为参比，在325nm下每隔30s测1次吸光值，连续记录3min，调节连