动物克隆研究进展及其展望教学教程.pptVIP

动物克隆研究现状及其展望一、国内外研究现状

（一）概述动物胚胎工程是当今生物工程的研究热点之一，目前主要向两头延伸：胚胎工程推广应用高深研究（胚移产业化）（克隆、转基因）分子克隆：人工扩增生物大分子

克隆（Clone）细胞克隆：细胞系

（无性繁殖）

胚胎细胞克隆

个体克隆（卵核移植）

体细胞克隆克隆源于希腊文，原意为树木的枝条，在生物学中系指一个细胞或个体以无性繁殖的方式产生一群细胞或一群个体，在不发生突变的情况下，具有完全相同的遗传性状，常称为无性繁殖系。细胞核移植技术：将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖就可被激活、分裂并发育成新的个体、使得核供体的基因得到完全复制。（二）哺乳动物胚细胞核移植胚胎细胞克隆重大进展技术基本成熟：如1枚牛胚获得了7头活牛犊。继代克隆：牛连续克隆至第7代，获得了第3代犊牛，1枚胚连续克隆获得了190枚胚胎；山羊继代克隆5代共获得了45只不同代的后代，1枚胚连续克隆获得了298枚胚胎。（类）胚胎干细胞系的建立：仅在小鼠上建立了ES系（EvansKaufman,1981;Martin,1981），意义很大，可用ES细胞进行核移植。1995年，英国学者Campbell等，利用9.5天绵羊胚胎滋养层细胞培养传3代后作为核供体获得了后代，曾被评为96年世界十大科技新闻之一。1999年，小鼠ES细胞克隆获得成功（Wakayamaetal.,1999），用长期培养的牛PGCs克隆后获得了一头公牛（Muelleretal.,1999）。（三）体细胞克隆进展成年体细胞：绵羊Dolly，乳腺上皮细胞，Wilmutetal.(1997)；小鼠30余只，卵丘细胞，Wakayamaetal.(1998)；牛，卵丘细胞（5），输卵管上皮（3），Katoetal.(1998)；老牛颗粒细胞（2），传代冻解，Wellsetal.(1998)；乳腺上皮原代细胞（1）与耳皮肤成纤维细胞（1），Zakhart-chenkoetal.(1999)；肌肉细胞（4），传4代，Shigaetal.(1999)；耳皮肤成纤维细胞培养3个月传15代，Kubotaetal.(2000)；山羊，张涌等（2000）；成勇等（2000）；Keeferetal.(2000)。猪，颗粒细胞核移植胚二次核移植，Polejaeveaetal.(2000)。胎儿成纤维细胞：绵羊，3只，Wilmutetal.(1997）；6只，Schniekeetal.(1997）；牛，Cibellietal.(1997);；Butler(1998)；Zakhartchenkoetal.(1999)；Vignonetal.(1999)；山羊，Baguisietal.(1999)；猪，Onishietal.(2000)。（四）哺乳类异种动物克隆研究进展指核供体细胞与核受体细胞来源于两个不同的种系。研究报导不多。尚未见有异种克隆个体产生的报导，但有一些获得异种克隆囊胚甚至胎儿的报导。大熊猫成年体细胞与去核兔卵母细胞重建得到了异种体细胞克隆囊胚（陈大元等，1999）。二、动物克隆的技术路线（一）供体核的分离技术1.胚细胞用0.2%链霉蛋白酶预处理胚胎,然后机械法剥离透明带,钝头玻璃吸管反复吹吸以分离成单个卵裂球。2.体细胞最早是用青蛙肠粘膜上皮细胞的核获得后代。Wilmut等将绵羊乳腺细胞在特定的实验条件下增殖培养6天，诱使细胞处于静止状态，以便染色质结构调整和核进行重组，从而获得了克隆绵羊“多莉”，开创了哺乳动物体细胞核移植（克隆）的新纪元。（二）受体细胞的去核技术现一般均采用超数排卵