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分子史上的经典事件?
答:1953watson和crick提出的DNA分子双螺旋模型在科研过程中,要具有清醒的宏观洞
察力、非凡的科学想像力和严密的逻辑思维能力,选择正确的研究路线,广泛借鉴他人的研
究成果并加以综合性的科学思考。
分子生物学的理论基础是?主要的研究策略有?(第一章)
答:1958年,克里克提出两个学说,奠定了分子生物学的理论基础。第一个学说是“序列
学说”,它认为一段核酸的特殊性完全由它的碱基序列决定,碱基序列编码一个特定蛋白质
的氨基酸序列,蛋白质的氨基酸序列决定了蛋白质的三维结构。第二个学说是“中心法则”,
遗传信息只能从核酸传递给核酸,或核酸传递给蛋白质,而不能从蛋白质传递给蛋白质,或
是从蛋白质传回核酸。研究策略:体内和体外实验的结合将遗传和DNA联系起来。体内
(Invivo)实验:在活体内进行的实验,包括在培养的细胞或组织。体外(Invitro)实验:
在细胞提取物中,或者是人工合成的细胞成分混合物中。
分子与其他学科关系?生物学离不开生物学技术?
答:分子生物学是由生物化学、生物物理学、遗传学、微生物学、细胞学、以至信息科学等
多学科相互渗透、综合融会而产生并发展起来的。现代生物学的发展越来越多的应用分子
生物学的理论和方法进行研究。
什么是分子生物学?
广义的概念:分子生物学是研究核酸、蛋白质等生物大分子形态、结构特征及其重要性、规
律性和相互关系的科学。
狭义的概念:从分子水平研究生物大分子的结构与功能从而阐明生命现象本质的科学,主
要指遗传信息的传递(复制)、保持(损伤和修复)、基因的表达(转录和翻译)与调控等,
也称之为基因的分子生物学。
DNA分子在结构上为什么最适合作为遗传信息载体?(第二章第一节)
化学性质比较稳定,DNA复制时严格遵守碱基互补配对原则,且为半保留复制;四种脱氧
核糖核苷酸可以组成不同的长链,可以携带大量遗传信息。
DNA提取操作要点是?(第二章第一节)
提取原则:保持一级结构的完整性,将其他生物大分子的污染降到最低。
提取流程:破碎细胞;DNA释放到水相;去垢剂或蛋白变性剂抽提;除去蛋白等杂质。DNA
沉淀,DNA溶解和保存。
DNA提取和鉴定的相关操作中需要注意什么?
1)DNA分子较大应注意防止机械张力将其打断,所以操作要轻柔,离心速度要控制。
2)要灭活DNA酶,采用0.01M的EDTA或者柠檬酸钠处理,或者用去垢剂(SDS)、蛋白变
性剂(苯酚、氯仿等)就可以基本灭活,此外,55℃处理也经常用于灭活残余的DNA酶。
3)除去蛋白质等杂质时酚抽提要彻底,上清要去尽,吸取上清时不要带有沉淀。
4)鉴定时注意电泳时的电压,电泳缓冲液的浓度,pH;选用合适的凝胶以及凝胶的浓度。
—
简述RNA的功能。
(1)RNA是一些病毒的遗传物质。
(2)与蛋白质合成有关,mRNA在功能上是基因和蛋白合成机器之间的中介;tRNA在功能
上是mRNA上密码子和氨基酸之间的衔接分子。
(3)有些RNA具有催化活性(核酶)。例如研究发现,四膜虫的26srRNA的单个内含子
在体外具有自我剪接功能;RNaseP中的RNA组分在体外能对tRNA前体进行加工。
(4)RNA可以通过多种途径调节基因表达。调解途径包括不同的RNA折叠,核糖开关,与
非编码RNA有关的RNA干扰现象、X染色体随机失活现象等。
获得高质量RNA的操作应注意什么?
RNA一般分子量较小,不易被机械拉力打断;最重要的是抑制RNA酶(RNase)的活性,
防止RNA被降解。因此,要创造一个严格的无RNA酶环境首先要防止外源RNase污
染:洁净实验室环境一次性手套,勤换;操作时可以带口罩。环境洁净(避免飞尘中细
菌、真菌产生外源性RNA酶污染,无空气对流)玻璃和塑料器皿处理。
玻璃:常规洗净后,200℃干烤4小时塑料器皿(离心管、枪头等):用0.1%的DEPC水常
温浸泡过夜,灭菌干燥后使用。溶液配制:加0.1%DEPC处理的双蒸水配制,高压除去
残留的DEPC。其次,抑制内源RNase的活性。抑制剂有β-巯基乙醇,异硫氰酸胍,十
二烷基肌酸钠。
1.简述蛋白质的功能和活性调控主要层
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