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仪器分析实验教案

实验题目：高效液相色谱法测定

饮料中的苯甲酸

教学目标：

1、了解高效液相色谱仪的基本结构及操作步骤。

2、理解反相色谱的原理及应用。

3、学习物质分离的条件选择。

4、学习物质的定性和定量分析方法

教学重点：

掌握物质分离操作条件的选择方法。

教学难点：

了解高效液相色谱仪的基本结构及操作步骤。

仪器药品：

LC-2010高效液相色谱仪；色谱柱VP-ODS（4.6mm×15cm）；

微量注射器；超声处理器；高纯水；甲醇（AR）；苯甲酸（AR）；

磷酸二氢钾（AR）。

教学方法：讲授、演示

教学时数：4学时

教学过程：（教师授课思路、设问及讲解要点）

一、实验原理

高效液相色谱法的原理与气相色谱法相似，但以

液体为流动相，适合于分析高沸点的有机化合物、高

分子、热稳定性比较差以及具有生物活性的物质。

苯甲酸具有抑制细菌生长和繁殖的作用，广泛应

用于食品工业中作为防腐剂。但是苯甲酸的过量摄

入，可对人们的健康造成危害：如苯甲酸进入人体后，

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仪器分析实验教案

在肝脏内与甘氨酸结合，代谢成马尿酸由尿排出，对

肝脏造成一定的损害；同时口服过多的苯甲酸，在体

内积蓄过多会对身体造成一定的危害。国家限定碳酸

饮料中苯甲酸的浓度不得超过0.07mg/ml,由于苯甲

酸价格低廉在食品工业中得到广泛的应用，因此有必

要学习苯甲酸的高效液相色谱法分离分析的操作方

法、分离条件的选择以及定性和定量的分析方法。

苯甲酸易溶于甲醇等有机溶剂，略溶于水，因此

苯甲酸为极性化合物，可以用甲醇与水的混和流动相

进行色谱分离分析；同时苯甲酸为弱酸性化合物，在

水中存在部分电离。因此正确选择流动相的极性和缓

冲流动相合适的PH是决定分离好坏的关键。当采用

甲醇与水作流动相时，甲醇和水的比例不同时，流动

相的极性得到改变，苯甲酸的峰形以及保留时间都有

所改变，同时缓冲流动相合适的PH值可以改变峰的

对称性以及解决拖尾现象，达到分离苯甲酸的目的，

并可对分析情况作出正确的评价。

检测器是检测采集被分离分析物质的重要因素。

一个理想的液相色谱检测器应具备以下特征：灵敏度

高；对所检测的物质具有快速的响应，并且响应对流

动相流量和温度变化不敏感；不引起柱外谱带扩展；