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嗅神经母细胞瘤的基因组特征和肿瘤免疫微环境研究
【摘要】目的探讨嗅神经母细胞瘤(olfactoryneuroblastoma,ONB)基因
组特征和肿瘤免疫微环境特点。方法对2018年5月至2022年10月在北京同
仁医院诊断的19例ONB患者,根据Hyams分级系统分为低级别和高级别两组,7
例为低级别,12例为高级别,将ONB患者组织标本进行全外显子测序和多重免
疫荧光分析。结果18例ONB鉴定出929个非同义突变,突变频率最高的癌症相
关基因是CTNNB1(3/19)和ZNRF3(3/19),突变频率最高的通路是Wnt和RAS
通路。中位肿瘤突变负荷(TMB)0.45个突变/Mb(范围为0~3.25),中位肿瘤
新抗原负荷(TNB)9.39个新抗原/Mb(范围为0~38.30),中位等位基因突变的
肿瘤异质性(MATH)得分为16.95(范围为3.05~117.47)。多重免疫荧光结果
显示1例表达细胞程序性死亡配体1(PD-L1;综合阳性评分1),CD8+肿瘤浸
润淋巴细胞(TIL)在肿瘤区域浸润的百分比中位数为1.08%。低级别组和高级
别组在突变基因、突变通路、TMB、TNB、MATH、PD-L1和CD8+TIL表达差异无
统计学意义(P0.05),但CD68+巨噬细胞在低级别组肿瘤区域和总区域均显著
多于高级别组(P0.05),M1型巨噬细胞占CD68+巨噬细胞80.52%。结论CTNN
B1和ZNRF3是ONB高频突变基因;PD-L1低表达和CD8+TIL数量低提示ONB可
能对免疫治疗不敏感;M1型巨噬细胞在低级别ONB表达显著高于高级别,提示
可能参与ONB进展。
【关键词】头颈部肿瘤;遗传学;免疫学
嗅神经母细胞瘤(olfactoryneuroblastoma,ONB)是一种少见的鼻腔鼻
窦恶性肿瘤,起源于嗅神经上皮[1],目前的治疗方法以手术切除为主,根据
需要结合放疗和/或化疗[2],ONB复发常见,上述多模式非靶向治疗对于复发
性ONB的临床疗效有限[3]。由于ONB病例比较少见,基因组数据缺乏,限制
了诊疗水平的提高,另外,目前免疫治疗已经广泛应用于多种肿瘤的治疗,程序
性死亡受体1(PD-1)及其配体(PD-L1)抑制剂用于复发/转移性头颈部鳞状
细胞癌的治疗取得了突破性成就[4],然而,PD1/PD-L1在ONB中的作用机制
尚不清楚。在本研究中对19例ONB样本进行了全外显子测序和多重免疫荧光(M
IF)分析,并比较了低级别组和高级别组基因差异和免疫细胞表达差异,有助于
丰富ONB基因库和为ONB的免疫治疗提供依据。
资料与方法
1.病例资料:收集2018年5月至2022年10月在北京同仁医院诊断的19
例ONB患者,由经验丰富的2位病理医师进行独立评估,确认病理诊断和病理分
级,确保肿瘤含量≥20%。病理分级按照Hyams分级系统,该分级是基于评估小
叶结构、核分裂象、核多形性、神经原纤维基质、坏死、钙化、菊型团的四级分
级标准,将ONB分为低级别组(HyamsⅠ和Ⅱ)和高级别组(HyamsⅢ和Ⅳ)
[5]。肿瘤分期根据Kadish分期系统:肿瘤局限于鼻腔为KadishA期、延伸
到鼻窦为KadishB期、肿瘤浸润范围超出鼻腔鼻窦为KadishC期。本研究经
北京同仁医院伦理委员会批准(批号:MR-11-23-000050)。
2.方法:(1)DNA提取与全外显子组测序分析:使用QIAampDNA石蜡包埋
组织(FFEP)试剂盒(德国Qiagen公司)从FFEP标本中提取DNA。目前使用F
FPE进行全外显子测序的技术比较成熟[6],在ONB中的研究也有相关报道[7
-9]。使用Qubit3.0荧光仪(美国ThermoFisherScientific公司)评估
分离DNA的量和质量。使用TwistHumanCoreExomeKit(美国TwistBiosci
ence公司)按照制造商的方法进行文库构建。在IlluminaNovaSeq6000平台(美
国Illumina公司)上进行150bp的双端测序。测序后的序列首先使用fastp过
滤[10],然后使用Burrows-WheelerAligner与参考基因组(hg19)比对[1
1]。单核苷酸变异、小插入和缺失通过Mutect2和TNseq进行鉴定[12]
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