酶类药物的分析课件课件.ppt

*第三节酶活力测定方法固定时间法连续监测法（一）、需NAD+或NADP+作指示的连续监测法：直接测定法偶联法三联酶活测定（二）、不需NAD+或NADP+作指示的连续监测法：固定浓度法第94页,共96页，星期六，2024年，5月*第四节酶活性测定方法的设计一、影响因素二、底物与产物的测定方法三、测定条件的选择1、单因素选择2、正交设计——多因素选择第95页,共96页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第96页,共96页，星期六，2024年，5月*方法:第62页,共96页，星期六，2024年，5月*3、尿激酶（Urokinase）由人尿制得的一种碱性蛋白水解酶。主要作用是激活人体内纤维蛋白溶酶原使其成为有活性的纤维蛋白溶酶，从而解聚血纤维蛋白，溶解血栓。天然尿激酶的分子量为54000，其作用于纤维蛋白溶解酶原的赖氨酸或精氨酸键使其裂解成纤维蛋白溶解酶。第63页,共96页，星期六，2024年，5月*效价测定原理(气泡上升法)尿激酶激活人体内纤维蛋白溶酶原使其转化成纤维蛋白溶酶；纤维蛋白原在凝血酶的作用下，转变成纤维蛋白凝块，此凝块在纤维蛋白溶酶作用下，水解为可溶性小分子多肽。在纤维蛋白溶酶原过量的情况下，尿激酶量与纤维蛋白凝块的溶解时间的对数成直线关系。第64页,共96页，星期六，2024年，5月*操作(气泡上升法)试管中加纤维蛋白原溶液0.3ml（37℃水浴）标准品(或供试品)1.0ml加混合溶液0.4ml立即摇匀计时，反应系统应在30～45秒内凝结，当凝块内小气泡上升到系统体积一半时作为反应终点。以尿激酶的浓度为横坐标，以反应时间的对数为纵坐标。第65页,共96页，星期六，2024年，5月*二、脂键水解酶－

胰脂肪酶(PancreaticLipase)胰脂肪酶是一种水解酶，在一定条件下把甘油三脂类脂肪水解，最后生成甘油及脂肪酸。底物:橄榄油用已知浓度的标准碱溶液滴定，可定量地测定脂肪酸的量，从而得知脂肪酶活力。第66页,共96页，星期六，2024年，5月*测定第67页,共96页，星期六，2024年，5月*计算每分钟水解橄榄油产生1μmol脂肪酸的酶量，为1个活力单位。每克含有的胰脂肪酶单位A:供试品消耗NaOH（0.1mol/L）的体积B:空白消耗NaOH（0.1mol/L）的体积W:供试品取样量（g）N:供试品稀释倍数。第68页,共96页，星期六，2024年，5月*三、糖苷键水解酶－溶菌酶蛋清中提取的能分解粘多糖的碱性水解酶。溶菌酶（Lysozyme）具有抗菌、抗病毒等作用。溶菌酶分子量为14000～15000，由129个氨基酸残基组成，等电点为10.0~11.1。溶菌酶属糖苷键水解酶，能以某些细菌细胞中的多糖为底物。第69页,共96页，星期六，2024年，5月*溶菌酶作用位点第70页,共96页，星期六，2024年，5月*青霉素转肽酶底物末端的二肽D-Ala-D-Ala结构第71页,共96页，星期六，2024年，5月*效价测定－比浊法以溶酶小球菌为底物，主要成分为粘多糖，粘多糖由NAG和NAM重复而成。只能水解NAMC1和NAGC4之间的β－1，4糖苷键。溶酶小球菌胞壁中的粘多糖经过溶菌酶的水解后，导致溶菌，溶液的吸收度下降。在一定的条件下，每分钟吸收度下降0.001为一个酶活力单位。第72页,共96页，星期六，2024年，5月*比浊法测定计算：酶活力单位（u/mg）=W为测试液中供试品的重量（μg）第73页,共96页，星期六，2024年，5月*比色法-测定溶菌酶活性用染料艳红K－2BP标记的M.Lysodeikticus为底物，酶催化细胞壁分解时游离出染色碎片（产物）反应后离心除去未分解底物，上清液比色，吸收度为溶菌酶活力的函数。第74页,共96页，星期六，2024年，5月*溶菌酶效价测定－比色法第75页,共96页，星期六，2024年，5月*四、超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase）由动物红细胞制得的金属酶，能催化超氧阴离子转化成过氧化氢和氧。来源于牛、猪、人红血球的超氧化物歧化酶（SOD）含铜和锌，分子量32000左右。SOD对热较稳定，在pH5.3~9.5范围内对酶活性影响不大。牛红细胞SODPI为4.95。第76页,共96页，星期六，2024