生产用人血浆病毒核酸检测系统性能的验证.docxVIP

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生产用人血浆病毒核酸检测系统性能的验证

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摘要：目的：对生产用人血浆病毒核酸检测系统性能进行验证。

方法:核酸检测设备性能及检测方法的验证,验证内容为设备WanTag1.0核酸提取仪,伯乐CFX-96扩增仪的性能验证。检测方法验证：检测试剂灵敏度，精密度，抗污染能力验证,确认检测系统适用于人血浆病毒的检测。结果:所有验证项目均符合接受标准。结论:该核酸检测系统满足人血浆所需灵敏度,精密度要求,且在实验过程中无交叉污染现象发生,设施设备均符合要求。

关键词：血液制品核酸检测生产用人血浆

血液制品起始原材料为健康人血浆，存在经血液传播病毒的安全性风险。原料血浆处于病毒感染窗口期、病毒变异、免疫静默感染以及人为差错是导致病毒安全性漏检的原因，其中窗口期是血液免疫学漏检的主要原因［1］。随着病毒核酸检测（nucleicacidtesting，NAT）技术的发展，可明显缩短血浆感染病毒窗口期的检出期限，降低血源性病毒的传播风险［2］。原国家卫生计生委、食品药品监管总局要求2019年底前实现单采血浆站核酸检测全覆盖［3］。本文对我司生产用人血浆病毒核酸检测系统性能进行验证，确保核酸检测结果准确可靠。

1材料和方法

1.1材料和设备WanTag1.0核酸提取仪购自北京万泰公司，CFX96扩增仪购自伯乐；PCR（BCI）试剂盒购自北京万泰公司，质控品及盘购自康彻斯坦。

1.2方法

1.2.1核酸检测方法。方法采用混样、提取、扩增流程及WanTag1.0提取仪和CFX96扩增仪说明书迸行检测。

1.2.2WanTag1.0提取仪性能验证。WanTag1.0核酸提取仪性能验证包括周维护、提取加热模块、条码扫描检测、抓板机械臂夹放板功能、加样针加样精确度。

1.2.3CFX96性能验证。光路通道、温度检测、荧光信号强度。

1.2.4PCR检测方法验证。BCI试剂方法验证内容为分析灵敏度、精密度、抗交叉污染能力验证。①灵敏度：根据试剂盒灵敏度以WHO标准品为溯源的原料，用不含HBVDNA/HCVRNA/HIVRNA的血清稀释至指定浓度（表1）。可接受标准为：质控有效，内标有效，95%的HBV、HCV、HIV样本结果为阳性。②精密度：用HBVDNA，HCVRNA和HIV-1RNA的可溯源的质控血清（表2），每天重复测3次，连续测5天，需有内标、阴阳对照。接受标准：阴阳对照、质控、内标有效，CV值均小于5%。③抗交叉污染能力：按照血清盘顺序加样（表3），需有内标、阴阳对照。接受标准：阴阳对照、内标有效，所有标本结果与血清盘背景一致。

表1灵敏度分析验证盘

表2精密度质控血清表

项目

浓度IU/Ml）

次/天

天

HBV-DNA

200

3

5

HCV-RNA

1000

3

5

HIV-1-RNA

2000

3

5

表3血清盘加样顺序

编号

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

标本

HBV

HCV

HIV

阴性

HBV

HCV

阴性

HIV

阴性

HBV

编号

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

标本

阴性

HCV

HIV

阴性

HBV

HCV

HIV

阴性

HBV

HCV

项目

编号

试剂灵敏度（IU/Ml）

稀释后计算浓度（IU/Ml）

HBV-DNA

1～20

3

3

HCV-RNA

21～40

20

20

HIV-1-RNA

41～60

40

40

结果

2.1WanTag1.0提取仪验证结果。通过对WanTag1.0提取仪周维护、提取加热模块、条码扫描、抓板机械臂夹放板功能、加样针加样精确度进行确认验证，验证项目符合可接受标准（表5）。

表5提取仪验证结果

项目

软件或工具

操作

是否符合

周维护

Evoware软件

在软件中执行仪器周维护程序,验证是否通过。

符合

提取加热模块

SetupService软件

红外测温器

分析天平

用软件让提取加热模块加热到40、60、80度，使用红外测温器检测，判断加热模块升降温是否符合标准。红外测温器每年标定一次。

符合

扫描模块

运行软件，对样本管条码进行扫描，人为判定是否符合标准通过。

符合

加样针加样精确度

使用分析天平，执行Liquid程序，仪器自动吸取100ul和10ul纯水进行称重，看精确度是否在合理范围内。结果由软件自动输出。分析天平每年标定一次。

符合

抓板机械臂夹板放板功能

Evoware软件

运行Robot命令，人为观察判断夹、放板位置是否符合标准通过。

符合

2.2CFX96扩增仪性能验证结果。通过对CFX96扩增仪光路通道、温度检测、荧光信号强度的确认验证，所有验证结果均符合可接受标准（表6）。

表6扩增仪验证项目

项目

软件工具