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平面色谱;2.1.1平面色谱法的分类与原理;纸色谱法;薄层色谱法;电泳法; 比移值Rf是溶质移动距离与流动相移动距离之比,即
Rf=1,组分随展开剂至前沿
Rf=0,组分留在原点
所以Rf在0~1之间; 若Rf值的重现性较差时,可将被分离物质与一
参比物在同一薄层分离。参比物比移值Rf(i)与被测
物比移值Rf(s)之比称为相对比移值。
Ri,s的重现性优于Rf值,数值可大于或小于1。;2.1.3分配系数与比移值的关系; ;2.1.4平面色谱的特点;平面色谱独有的优点
操作简单,价格便宜,应用范围广
固定相是一次性使用,样品预处理简单,且试样全部组分均停留在平面上,不会造成检测失落,对未知试样的分析很有利
可同时平行分离多个试样
对成份复杂的试样可采用不同类型的流动相双向展开,提高分离效能;2.2.1滤纸;色谱用滤纸纤维的方向会影响分离,故每
次展开时,滤纸的纤维方向应一致
商品滤纸有厚纸、薄纸、慢速、快速、中
速等不同类型可供选择;2.2.2薄层板;硅胶; 硅胶的含水量越大,吸附活性越低,吸附能力(活性、活度)一般分为五级:; 若加热温度大于500,则硅胶不可逆地失去结合水形成硅氧烷结构:;氧化铝;纤维素;普通纤维素:天然纤维素、高纯度纤维素、微晶纤维素。
乙酰化纤维素:用乙酸将纤维素结构上的
羟基脂化而成,适用于反相色谱。
离子交换纤维素:纤维素经化学反应,使
分子中心的一部分羟基上的氢被阳离子或
阴离子交换基取代而成,具有离子交换树
脂的性质。
;聚酰胺;葡聚糖;薄层板的种类;吸附剂及预制板包装上的符号及含义;2.3平面色谱的流动相(展开剂);多元溶剂系统中各组分按其性能可分为三类:
第一类:对被分离物质溶解度很小的有机
溶剂;
第二类:对被分离物质溶解度很大的溶剂
(一般为水),用于调节各组分的
Rf值,使各组分均匀地分布在纸上。
第三类:调节溶剂系统的pH值或调节各组分
之间的比例。
例:分离氨基酸的溶剂系统:
正丁醇:甲酸:水=15:3:2
;2.3.2薄层色谱的流动相(展开剂);{;2.4.1点样;2.4.2展开;优点:操作简单,重???性好,常用;②径向展开法(水平法);③双向展开法;2.4.3定位与定性;a色谱床的影响;b相对湿度的影响;c溶剂系统的影响;d温度的影响;epH值的影响;为控制电泳速度,必须使用缓冲溶液;f电渗的影响;g其他因素;(2)斑点的显色特性;(3)斑点的原位光谱扫描;b三维光谱扫描;用平面色谱对粗提物进行分离与纯化,然后再用其他方法分析、鉴定。;(1)半定量;b限量检查法;(2)定量;;展开后斑点直径(mm)
展开距离(cm)
分离时间(min)
板高()
有效塔板数
每块板点样数
分离数
检测限:吸光(ng)
荧光(pg)
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