考点1基因工程考点总结.doc

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第一讲基因工程

考纲要求1.基因工程的诞生(Ⅰ);2.基因工程的原理及技术(Ⅱ);

3.基因工程的应用(Ⅰ);4.蛋白质工程〔Ⅰ〕

知识网络

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思考连接处

(1)基因工程和细胞工程操作的工具酶有什么不同？

前者涉及和；后者涉及、果胶酶和。

(2)转基因植物的培育涉及到哪些生物工程？

、(植物细胞工程)。

(3)转基因动物的培育涉及到哪些生物工程？

、、。

考点一：基因工程的工具〔选修三P4-6〕

1.比拟限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶、解旋酶和DNA酶

种

类

工程

限制性核酸内切酶

DNA连接酶

DNA聚合酶

RNA聚合酶

解旋酶

DNA酶

作用

底物

DNA分子

片段

核苷酸

核苷酸

DNA分子

DNA分子

作用

部位

磷酸二酯键

磷酸二酯键

磷酸二酯键

磷酸二酯键

碱基对间的

键

磷酸二酯键

作用

结果

形成性末端或末端

形成

DNA分子

形成新的

分子

形成

分子

形成单链DNA分子

核苷酸

注意：限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在改酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

2.区分一个至多个限制性核酸内切酶切点与每种酶一个切点

(1)一个至多个限制性核酸内切酶切点：作为载体必须具有一个至多个限制性核酸内切酶切点，以便与外源基因连接。

(2)每种酶一个切点：每种酶的切点最好只有一个。因为一种限制性核酸内切酶只能识别单一切点，假设载体上有一个以上的酶切点，那么切割重组后可能会丧失某些片段，假设丧失的片段含复制起点区，那么进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体假设只有某种限制性核酸内切酶的一个切点，那么酶切后既能把环翻开接纳外源DNA片段，又不会丧失自己的片段。

考点二：基因工程的根本的操作程序〔选修三P8-15〕

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目的基因的来源：从自然界已有的中别离出来，也可以用的方法合成。〔选修三P8〕

〔2〕获取方法：

直接别离法；从基因文库〔文库或文库〕中获取；利用技术扩增

人工合成法：化学合成法——针对序列的较小基因

反转录法——以为模板，在酶的作用下人工合成

基因表达载体的组成及作用准确识记课本11页插图图1—10

〔2〕重组DNA分子的构建过程

3.将目的基因导入受体细胞

植物细胞

动物细胞

微生物细胞

常用

方法

转化法〔适用于子叶植物和裸子植物〕、枪法〔使用于单子叶植物〕、

通道法

注射技术

感受态细胞法(用处理)

受体

细胞

、体细胞

卵

核细胞

4.目的基因的检测与鉴定

DNA分子杂交法、分子杂交法：探针——含有基因的DNA片段用同位素标记

注意：基因工程操作程序易错点剖析

〔1〕基因表达载体≠载体，基因表达载体与载体相比增加了

〔2〕目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子和终止子的调控，所以目的基因插入到

和之间的部位，假设目的基因插入插入启动子的内部，启动子终将失去原功能

〔3〕启动子≠起始密码子，终止子≠终止密码子：启动子和终止子位于片段上，分别控制过程的启动和终止；起始密码子和终止密码子位于RNA上，分别控制翻译的启动和终止。

〔4〕切割目的基因和载体并非只能用同一种限制酶。如果用两种不同的限制酶切割后形成的粘性末端同，在DNA连接酶的作用下目的基因与载体也可以连接起来。

〔5〕基因工程操作过程中只有第步不涉及碱基互补配对现象。

考点三基因工程的应用与蛋白质工程

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乳腺生物反响器：将外源基因在动物的乳腺组织中特异性表达，利用动物的乳腺组织生产药物蛋白。例如：科学家将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的等调控组件重组在一起，通过法，导入哺乳动物的中，然后，将受精卵送入母体中，培育成转基因动物。转基因动物期后，从乳汁中获取所需的药物。

工程菌：