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细菌的生理生化实验--第1页

1目的

1.1了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理

1.2掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法

2原理

各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞

原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用

糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也

不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。即使在分子生物

学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴

定中仍有很大作用。

3材料

3.1菌种

大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌

（Enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（Proteusvulgaris）、枯草

芽孢杆菌（Bacillussubtilis）的斜面菌种

3.2培养基

葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、

乳糖或蔗糖）

3.3试剂

40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基

酚紫指示剂。

3.4器具

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细菌的生理生化实验--第2页

超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。

4流程

糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验

5步骤

(一)糖类发酵试验

1目的

了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．

2原理

可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌

种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即

B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），

经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基

中放入倒置杜氏小管观察。

3材料

3.2菌种

大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌

（Enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（Proteusvulgaris）的斜面

菌种

3.３培养基

葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管

４流程

发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录

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细菌的生理生化实验--第3页

5步骤

5.1试管标记图9-1糖发酵产气

取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；

Ｂ产气

4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变

形菌和空白对照。

5.2接种培养

以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养

液的空白对照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中

（图9-1），置37℃恒温箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h

观察结果。

5.3观察记录

与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表

明该菌不能利用该种糖，记录用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结

果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。培养液中

的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记

录用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“－”表示。

（二）乙酰甲基甲醇试验(V．P试验)