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DNA重组实验常见问题分析--第1页

Sirtuinsaspotentialtargets

formetabolicsyndrome

LeonardGuarente

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Metabolicsyndromethreatenshealthgainsmadeduringthepastcentury.

Physiologicalprocessesdegraded

bythissyndromeareoftenoppositelyaffectedbycalorierestriction,which

extendslifespanandprevents

diseaseinrodents.Recentresearchinthefieldofageinghasbegunto

identifyimportantmediatorsof

calorierestriction,offeringthehopeofnewdrugstoimprovehealthspan.

Moreover,ifmetabolicsyndrome

andcalorierestrictionareoppositeextremesofthesamemetabolicspectrum,

calorierestrictionmimetics

mightprovideanothertherapeuticapproachtometabolicsyndrome.Sirtuins

andotherimportantmetabolic

pathwaysthataffectcalorierestrictionmayserveasentrypointsfordrugs

totreatmetabolicsyndrome.

长寿蛋白作为代谢综合症的潜在目标

在二十世纪，代谢综合症威胁着人类的健康。相反地，该综合症导致的生理过

程退化常常受到卡路里限制。卡路里限制会延长寿命，保护啮齿类不生病。在

有关老龄化的领域里，最近有研究开始鉴别卡路里限制的重要中介，这为研制

新的药物提高寿命提供了希望。并且，如果代谢综合症和卡路里限制是同样代

谢光谱的两个相反极端的话，卡路里限制模仿将为治疗代谢综合症提供了新的

途径。长寿蛋白和其他重要的影响卡路里限制的蛋白途径可能作为治疗代谢综

合症药物的入口点。

载体用NotI单酶切，目的片段也用NotI单酶切，并对载体进行去磷酸化，但一直也没连上？

参考见解：

1、用NEB的高效连接酶连看看，用400U或2000U的试试

2、16度过夜连接，或更长

3、单酶切用PCR来鉴定方向方便些

4、去磷酸化后，将去磷酸化酶失活很重要，否则可能根本连不上。

5、失活的方法很多了，可以加热（有的热敏感酶可以），可以直接过胶回收柱子，但比较放心的方法就

是跑胶回收。

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PCR扩增到特异性产物后，回收PCR产物，PCR产物用BamHI和EcoRI（NEB公司的酶）在随

EcoRI的BUFFER中双酶切8小时，同时，pUC18同样酶切，连接片段和载体DNA酶切均用

QIAGENquickspincolumn回收片段，按NEB连接酶说明过夜连接，连接产物电转化。但是，看

转化结果，连接产物转化的平板大部分是蓝斑？什么原因？

参