DB12∕T 838-2018 辣椒种子纯度SSR分子标记鉴定方法.docx

ICS65.020.20B04津

ICS65.020.20

B04

津

DB12

市地方标准

DB12/T8382018

天

201811-07发布20181201实施

辣椒种子纯度SSR分子标记鉴定方法

MethodofidentifyingseedpurityofpepperbyusingSSR-basedmarker

天津市市场和质量监督管理委员会发布

本标准按照GB/T

本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由天津市农村工作委员会提出并归口。

本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、天津市蔬菜研究中心、黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所。

本标准主要起草人：兰青阔、吕敬刚、赵新、王成、兰璞、焦荻、高素燕、陈锐、关海涛、张耀中、焦贺敏。

刖言

I

DB12/T838—2018

辣椒种子纯度SSR分

辣椒种子纯度SSR分子标记鉴定方法

DB12/T838—2018

1范围

本标准规定了辣椒种子纯度SSR分子标记鉴定方法的原理、仪器设备及试剂、方法步骤、纯度计算。本标准适用于辣椒单交种的纯度鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

聚合酶链式反应polymerasechainreaction(PCR)一种在体外通过酶促反应扩増特异DNA片段的技术。

3.1

3.3

3术语和定义

种子纯度seedpurity

种子在SSR分子标记带型方面典型一致的程度，用具有本品种特异带型的种子粒数占鉴定样品种子

粒数的百分率表示，以反映某品种特征特性的一致性程度。

3.2

下列术语和定义适用于本文件。

4原理

SSR分布于辣椒整个基因组，每个位点上重复单位的数目不同造成了品种间的多态性，利用PCR技术将多态的SSR扩増出来，通过电泳检测扩増产物，利用电泳图谱进行辣椒种子纯度鉴定。

5仪器设备及试剂

1

分子标记molecularmarker

以蛋白质、核酸分子的多态性为基础，鉴定生物在遗传上的差异。

简单重复序列simplesequencerepeat(SSR)

由几个核苷酸（1?6个）为重复单位聚集而成的长达几十个至几百个bp(般为100?200)的串联

重复序列，又称微卫星序列或短串联重复序列，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。

3.4

6方法步骤6

6方法步骤

6.1取样

检测样品的分样和保存，应符合GB/T3543.2的规定，从中随机取100粒以上种子，取其父母本材料各10份。

6.2单粒种子的DNA提取

6.2.1样品预处理

在玻璃培养皿底部垫上一层厚度约3mm的棉花或滤纸，用水浸湿后均匀地撒上检测样品，再于表面覆盖一层纱布，置于光照培养箱中。培养条件为16h35°C光照培养，8h28°C暗培养，待种子长出子叶后备用。

6.2.2DNA提取

取单株幼苗子叶，放入1.5mL离心管中，在液氮中研碎，放入1.5mL离心管中。将DNA提取液预热到65°C，每管放入400混合样品，将离心管置于65°C金属浴或水浴锅中，保温30min后取下，向离心管中加入400pL24:1氯仿-异戊醇:V)，振荡混匀。10000g离心10min。将上清液200pL转入另一支1.5mL离心管，加入400pL-20°C预冷无水乙醇沉淀DNA。10000g离心1min，弃上清液，加入500pL乙醇—乙酸铵溶液，6000g离心5min收集沉淀。加入100pLTE(pH8.0)溶液溶解DNA。

6.2.3DNA的浓度和质量

将DNA适当稀释或浓缩，使其OD26。值在0.1?0.8的区间内，测定并记录其在260nm和280nm的吸光度。以1个OD26。值相当于50mg/L