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吸光光度法

6.1.1吸光光度法的特点波长范围：10-1～10nm10～400nm400～750nm0.75～1000μm0.1～100cm1～1000m光谱区域：X射线紫外光可见光红外光谱微波无线电波光是一种电磁波，根据波长或频率排列。1.光的基本性质

2.吸收光谱产生的原理吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱光单色光复合光光的互补单一波长的光由不同波长的光组合而成的光两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色光光的互补示意图 红黄绿蓝青紫青蓝白光橙

KMnO4溶液的吸收曲线

(cKMnO4:abcd)

分子、原子、离子具有不连续的量子化能级，仅能吸收当照射光子的能量hv与被照射粒子的E激－E基＝（hv）n因为不同物质微粒的结构不同，共有不同的量子化能级，其能量差也不相同,因此对光的吸收具有选择性。若固定某一溶液的浓度C和液层厚度b，测量不同λ下的A，以吸光度A对吸收波长λ作图，就得到－吸收曲线，即吸收光谱。初步定性分析：不同物质吸收曲线的形状与最大吸收波长不同。定量分析：不同C的同一物质在吸收峰附近的A随C↑而增大，吸收曲线是吸光光度法中选择测定波长的主要依据。返回

3.目视比色法和吸光光度法的特点主要用于微量组分特点:(1)灵敏度高：测定含量为1%~10-3%的微量组分及测定含量为10-4%~10-5%的痕量组分。(2)准确度较高：比色法相对误差5%~10%；分光光度法相对误差2%~5%。(3)应用广泛，操作简便、快速。

6.1.2光吸收的基本定律1、朗伯—比尔(Lambert—Beer)定律①光通过溶液的情况:Ia为吸收光强度It为透过光强度Ir为反射光强度Io表示入射光强度Io=Ia+It+Ir因为Ir在测定试样和空白溶液时其影响可相互抵消，故可简化为:Io=Ia+It②透射比T（Transmittance）的定义T=It/Io

③吸光度A（Absorbance）的定义：A=lgIo/It因为T=It/10所以A=lgI0/It=lg1/T④Lambert—Beer定律的数学表达式：A=Kbc2.摩尔吸收系数当A=Kbc式中的b用cm为单位,c用mol·L-1为单位时，K用ε表示；得A=εbcε称为摩尔吸收系数mol-1·cm-1ε与吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素有关。K为比例常数，b为液层厚度，c为溶液浓度

6.1.3比色法和吸光光度法及其仪器1.目视比色法：比较透过光的强度标准色阶：在相同条件下显色，目视比较。特点：灵敏度高，准确度低，不同人看，结果不同，不符合朗伯－比尔定律也可用目视比色法，因为比较的是透过光。2.吸光光度法：与光电比色法的原理相同，只是二者获得单色光的方法不同，前者使用滤光片，后者使用光栅、棱镜，因而比光电比色法的准确度和选择性好。3.分光光度计及其基本部件：光源－单色器－比色皿（吸收池）－检测器－显示器

（1）光源:钨丝灯:可见、红外400－1000nm氢灯或氘灯：紫外160－350nm（2）单色器：a.滤光片：有机玻璃片或薄膜，利用颜色互补原理。b.棱镜：根据物质的折射率与光的波长有关。玻璃棱镜:可见,石英棱镜:紫外、可见。c.光栅：在玻璃片或金属片上刻划均匀的线，1200条/mm,衍射、干涉原理。（3）吸收池:玻璃:可见,石英:紫外、可见（4）检测器:光电转换器件（光电管、光电倍增光，光电二极管阵列）。利用光电效应，光照产生光电流，测定光电流的大小。（5）显示器:检流计：72型。数字显示：722型。数字打印：UV-240

6-2分光光度法设计6.2.1显色反应6.2.2显色条件的选择6.2.3测量波长和吸光度范围的选择6.2.4参比溶液的选择6.2.5标准曲线的制作返回

6.2.1显色反应1.定义：将待测组分转化成有色化合物的的反应。M＋L＝ML2.要求:（1）选择性好；（2）灵敏度高，104；（3）有