《mRNA疫苗及药物中dsRNA杂质定量检测-ELISA法》编制说明.docx

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《mRNA疫苗及药物中dsRNA杂质定量检测-ELISA法》

征求意见稿编制说明

一、工作简况

（一）任务来源

按照《中国食品药品企业质量安全促进会团体标准管理办法（试行）》的有关规定和要求，由国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量监测与评价重点实验室、武汉瀚海新酶生物科技有限公司提出《mRNA疫苗及药物中dsRNA杂质定量检测-ELISA法》立项申请，中国食品药品企业质量安全促进会于2024年4月组织专家按程序审议后予以立项。

（二）目的、意义及必要性

mRNA新冠核酸疫苗的开发和成功应用，快速推动了mRNA技术在预防性疫苗、治疗性疫苗和治疗性药物领域的广泛应用，mRNA与药物在疗效、研发速度周期、成本价格、生产的可拓展性和安全性等方面具有显著优势。mRNA疫苗的制备主要包括：前期研究确定抗原序列、质粒载体、扩增菌种、递送系统等相关参数，mRNA疫苗的生产主要包括质粒DNA（plasmidDNA，pDNA）模板的制备、mRNA原液的制备、mRNA的包封与灌装几个主要模块。其中，mRNA原液的制备和转录是疫苗生产的关键步骤，mRNA的质量直接决定了疫苗的临床表现。

在mRNA疫苗制备的体外合成过程中，T7RNA聚合酶可能以RNA或DNA（模板链与非模板链）为模板进行转录，形成不同类型的dsRNA副产物。dsRNA是引发机体炎症反应的诱导剂之一，可通过抗原呈递细胞激活固有免疫反应，触发信号通路的级联放大。外源dsRNA可被细胞中的Toll样受体（Tolllikereceptor，TLR）、维甲酸诱导基因-I（retinoicacidinduciblegeneI,RIG-I）和黑色素瘤分化相关蛋白5（melanomadifferentiationassociatedprotein5，MDA5）识别而激活信号通路，释放TNF-α和IFN-y等细胞因子，导致炎症反应的发生。此外，dsRNA所表现出的免疫原性，一方面会因为自身免疫系统与翻译系统间的反馈调节而降低mRNA的翻译效率；另一方面，dsRNA使机体形成记忆免疫，当mRNA药物需要重复给药时，会造成药物效力降低。因此，为监测和控制疫苗中主要杂质的残留量，保证疫苗及药物的安全性，需要在mRNA疫苗药物的生产过程中严格控制dsRNA的含量，这就要求生产厂商能对dsRNA进行精确定量检测。

2020年8月，国家药监局药审中心发布《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则（试行）》，2022年5月国家药监局药审中心发布《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》。美国药典（USP）分别于2022年2月、4月和2024年8月发布第一版、第二版和第三版《AnalyticalProceduresformRNAVaccineQuality（DraftGuidelines）》。2022年4月，WHO发布《evaluationofthequality,safetyandefficacyofmessengerRNAvaccinesforthepreventionofinfectiousdiseases:regulatoryconsiderations》。上述指导原则适用于mRNA类疫苗与药物的质量控制，均明确指出要控制mRNA相关杂质如5’非帽化RNA、双链RNA（dsRNA）、长链RNA、截短RNA等的含量。其中，USP《AnalyticalProceduresformRNAVaccineQuality（DraftGuidelines）》2ndEdition推荐dsRNA杂质的分析方法为Immunoblot和Enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)，其中，ELISA法更适合用于dsRNA定量分析。为推动我国生物医药标准与国际接轨，上述文件将作为本项目编制过程中的重要参考依据。

（三）团体标准起草单位和主要起草人

本标准起草单位：国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量监测与评价重点实验室、武汉瀚海新酶生物科技有限公司、中生复诺健生物科技（上海）有限公司、硅羿科技（上海）有限公司、江苏申基生物科技有限公司、云顶新耀医药科技有限公司、深圳源兴基因技术有限公司、苏州艾博生物科技有限公司、北京引正基因科技有限公司、楷拓生物科技（苏州）有限公司、成都威斯津生物医药科技有限公司、成都迈科康生物科技有限公司、惠正奇医药（广州）有限公司、固安鼎泰海规生物科技有限公司、广州正达医药科技有限公司、百奥泰生物制药股份有限公司、深圳深信生物科技有限公司。

本标准主要起草人：杨广宇、耿玉杰、李梁、陆家海、叶宇翔、唐雪明、竺添、武飞飞、刘