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细菌的生化反应实验报告--第1页
细菌的生化反应实验报告
微生物生理生化反应实验报告
2012年12月4日
姓名系年级2011级生科2班组别四
科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应
微生物的生理生化反应
一、【实验目的】
1.证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同,从
而说明不同微生物有着不同的酶系统。2.掌握进行微生物大分子
物质水解试验的原理和方法。3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚
定中的重要作用。4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意
义和方法。
二、【实验仪器与试剂】
菌种:枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单
胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基:培养基:固体淀粉培
养基、固体油脂培养基(大分子水解试验);葡萄糖发酵培养基、
乳糖
发酵培养基(内装有倒置的德汉氏小管)(糖发酵试验);蛋白
胨水培养基(吲哚试验);葡萄糖蛋白胨水培养基;
试剂:卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、
仪器:酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、
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德汉氏小管
三、【实验原理】
1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢,代谢
过程主要是酶促反应过程,由于各种微生物具有不同的酶系统,
所以他们能利用的底物不同,或虽利用相同的底物但产生的代谢
产物却不同,因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌,
尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中,生理生化试验占有重要的地位。
2.淀粉的水解:由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利
用,必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利
用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,
使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖
和单糖;而淀粉遇碘液会产生蓝色,因此能分泌胞外淀粉酶的微
生物,则能利用其周围的淀粉,在淀粉培养基上培养用碘处理其
菌落周围不呈蓝色,而是无色透明圈,据此可分辨微生物能否产
生淀粉酶。
3.油脂的水解:在油脂培养基上接种细菌,培养一段时间后观察
菌苔的颜色,若出现红色斑点,则说明此中菌可产生分解油脂的
酶。
4.糖发酵试验:糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在
肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳
源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些
细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢
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气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分
解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使
溶液呈黄色,且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能
使糖产酸产气,则最后溶液为指示剂的紫色,且德汉氏小管中无
气体。5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
(1)吲哚试验:是用来检测吲哚的产生,在蛋白胨培养基中,
若细菌能产生色氨酸酶,则可将蛋白
胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚,吲哚与对二甲基苯甲醛反应
生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸
产生吲哚的能力,所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
的指标。大肠杆菌吲哚反应阳性,产气肠杆菌为阴性。
(2)甲基红试验(MR):某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖
生成丙酮酸,后者进而被分解产生甲酸,
乙酸和乳酸等多种有机酸,培养基就会变酸,使加入培养基中
的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色,即甲基红反应。大肠杆菌
为阳性,产气肠杆菌为阴性。
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