《生物制药技术》课件——45 核酸类药物原料制备方法（核苷、核苷酸及碱基的制备）.pdfVIP

生物制药技术

BiopharmingTechnology

核酸类药物原料制备方法

（核苷、核苷酸及碱基的制备）

学习内容：

（1）直接提取法

（2）水解法

（3）酶解法、发酵法、化学合成法

学习重点：

不同提取制备方法的特点

一、直接提取法

关键：去杂质。

多次溶解、沉淀。

如：从兔肌肉中提取ATP和从酵母或白地霉中提取辅酶

A（ADP的衍生物或类似物，用于白细胞减少、血小板减

少）。

注射用辅酶A

二、水解法

核酸水解为寡核苷酸、核苷酸、核苷及碱基等。

酸水解、碱水解、酶水解。

化学降解，外源性酶解，内源性酶解（自溶）。

尿嘧啶核苷

1、酶水解法：在酶催化下的水解方法

如：制备5’-（脱氧）核苷酸

指明所用酶的来源，如牛胰核糖核酸酶（RnaseA）、

蛇毒磷酸二酯酶（VPDase）、脾磷酸二酯酶（SPDase）等。

脱氧核糖核酸酶

2、碱水解法：在稀碱条件下可将RNA水解成单核苷酸，

产物为2’-核苷酸和3’-核苷酸的混合物。

如：1mol/L的碱，室温条件下，使RNA水解成核苷酸，

相同条件下DNA水解就较少。

DNA较RNA易为酸（如甲酸，过氧酸等）所水解。

3、酸水解法

1mol/L的盐酸溶液，100℃，加热1h，RNA水解成嘌

呤碱和嘧啶碱核苷酸的混合物；DNA的嘌呤碱也被水解下来。

高压釜或封闭管中，酸水解，使嘧啶碱从核苷酸上释放

下来，但胞嘧啶常会脱氨基而形成尿嘧啶。

核糖核苷的制备：更剧烈的水解条件

浓氨水溶液

50%甲酰胺水溶液

核苷酸、核苷及碱基的进一步分离纯化

同DNA与RNA

三、酶解法、发酵法、化学合成法

制备核酸类药物

1.生物体自身能够合成的核酸类药物：基本上都可以

经由微生物发酵或从生物资源中提取。

酵母发酵法生产制备RNA

发酵法：利用微生物的特殊代谢使某种代谢物积累，从

而获得该产物。

如：微生物在正常代谢下肌苷酸IMP是中间产物，不

积累，当其突变为腺嘌呤营养缺陷型后，肌苷酸就不能转化

成AMP，大量的肌苷酸就成为终产物而积累在发酵液中。

可发酵制备肌苷酸。

2.自然结构碱基、核苷、核苷酸的结构类似物或聚合

物的核酸类药物（如三氟代胸苷、阿糖胞苷、巯嘌呤、氟尿

嘌呤等）：大部分由自然结构的核酸类半合成，发展为用化

学-酶合成法制备。

A.化学合成法

目的：以自然结构的核酸类物质作原料，半合成为其结

构改造物，常与酶合成法同时使用。

B.酶合成法：利用酶系统和模拟生物体条件。

总结：核苷酸、核苷及碱基的制备

l直接提取法

l水解法

l酶解法、发酵法、化学合成法