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ELISA试验中所用物品及试剂详解

ELISA试验中所用物品及试剂详解

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文(2.2)已述，ELISA中有

三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含

以下各组分:

(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);

(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);

(3)酶的底物;

(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量

测定中);

(5)酶联物(结合物)及标本的稀释液;

(6)洗涤液;

(7)酶反应终止液。

3.1免疫吸附剂

已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个

月以上。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。

以下简述固相载体和包被过程。

3.1.1固相载体

固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。可作

ELISA中载体的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋

白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它

的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。

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ELISA载体的形状主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板

最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8

×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，

放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量

标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器

用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操

作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋

白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接

法测抗体时空白值较大。

良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、

同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不

同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板

在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法为:以一定浓度的人IgG(一般为

10ng/ml)包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗

体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控

制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部读数的平均值。所有单

个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。

与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为ELISA固相载体，聚氯乙烯的特

点为质软板薄，可剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙

烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。

为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可应用如下的试验:用其他免

疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，

在不同的固相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定，然后比较结果。在哪

一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大，这种载体就是这一ELISA测定项目

的最合适的固相载体。

在ELISA中，用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠，表面经磨